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簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀的系統(tǒng)組成
2020年06月08日 15:21:10
來(lái)源：化工儀器網(wǎng) 點(diǎn)擊量：7446
近期，隨著疫情的發(fā)展，人們對(duì)醫(yī)療相關(guān)的科學(xué)儀器也認(rèn)識(shí)不少。其中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀這個(gè)名字經(jīng)常出現(xiàn)在人們的眼前。那么，這個(gè)儀器究竟是什么呢？用來(lái)干嘛的呢？今天，小編就為大家簡(jiǎn)單介紹一下這個(gè)設(shè)備。
【化工儀器網(wǎng) 技術(shù)指導(dǎo)】近期，隨著疫情的發(fā)展，人們對(duì)醫(yī)療相關(guān)的科學(xué)儀器也認(rèn)識(shí)不少。其中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀這個(gè)名字經(jīng)常出現(xiàn)在人們的眼前。那么，這個(gè)儀器究竟是什么呢？用來(lái)干嘛的呢？今天，小編就為大家簡(jiǎn)單介紹一下這個(gè)設(shè)備。
實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成，用來(lái)監(jiān)測(cè)循環(huán)過(guò)程的熒光。與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過(guò)開(kāi)發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對(duì)于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開(kāi)始分析。實(shí)時(shí)設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來(lái)彌補(bǔ)背景熒光的差異。正常化后可以設(shè)定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
優(yōu)勢(shì)
樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點(diǎn)的循環(huán)數(shù))。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為大，這樣可以獲得準(zhǔn)確，可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時(shí)擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以用來(lái)計(jì)算未知樣品的濃度。
系統(tǒng)組成
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要由兩部分組成，一個(gè)是PCR系統(tǒng)，一個(gè)是熒光檢測(cè)系統(tǒng)。由于定量PCR必需借助樣本和標(biāo)準(zhǔn)品之間的對(duì)比來(lái)實(shí)現(xiàn)定量的，對(duì)于定量PCR系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，重要的參數(shù)除了傳統(tǒng)PCR的溫控精確性、升降溫速度等等，更重要的還在于樣品孔之間的均一性，以避免微小的差別被指數(shù)級(jí)放大。
至于熒光檢測(cè)系統(tǒng)，多色多通道檢測(cè)是當(dāng)今的主流趨勢(shì)，儀器的激發(fā)通道越多，儀器適用的熒光素種類越多，儀器適用范圍就越寬；多通道指可同時(shí)檢測(cè)一個(gè)樣品中的多種熒光，儀器就可以同時(shí)檢測(cè)單管內(nèi)多模版或者內(nèi)標(biāo)+樣品，通道越多，儀器適用范圍越寬、性能就更強(qiáng)大。
熒光檢測(cè)系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測(cè)器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源，前者可配多色濾光鏡實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長(zhǎng)，而單色發(fā)光二極管LED價(jià)格低、能耗少、壽命長(zhǎng)，不過(guò)因?yàn)槭菃紊枰煌腖ED才能更好地實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長(zhǎng)。監(jiān)測(cè)系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管，前者可以一次對(duì)多點(diǎn)成像，后者靈敏度高但一次只能掃描一個(gè)樣品，需要通過(guò)逐個(gè)掃描實(shí)現(xiàn)多樣品檢測(cè)，對(duì)于大量樣品來(lái)說(shuō)需要較長(zhǎng)的時(shí)間。定量PCR儀需要考慮的另外一個(gè)因素是軟件設(shè)計(jì)，這一點(diǎn)目前較新型號(hào)的儀器都有不錯(cuò)的配套軟件可以滿足常規(guī)使用。
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