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            首頁   >>   技術文章   >>   【飛諾美色譜】山楂卷中展青霉素的分析方法

            艾杰爾飛諾美

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            【飛諾美色譜】山楂卷中展青霉素的分析方法

            閱讀:577      發布時間:2024-11-26
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            本實驗根據GB 5009.185-2016建立了山楂卷中展青霉素的前處理方法,采用Cleanert® PAX結合高效液相色譜的檢測方法,對山楂卷中的展青霉素進行了測定。樣品經提取和酶解處理后,用Cleanert® PAX進行凈化,Venusil HLP C18(5 µm,4.6 × 250 mm)色譜柱進行檢測,外標法定量。


            結果表明,當展青霉素加標量為0.1 mg/kg時,回收率為105.6%,能夠滿足檢測要求。

             

            實驗

            部分

            儀器、試劑與材料

             

            主要儀器設備/耗材


            ·高效液相色譜儀

            試劑材料

            ·甲醇、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純;乙酸、乙酸銨為分析純

            ·5 mmol/L乙酸銨溶液:稱取0.38 g乙酸銨,加水溶解并定容至1000 mL

            ·乙酸溶液:取10 mL乙酸,加入250 mL水中,混勻

            ·展青霉素標準溶液:乙腈溶解

            ·果膠酶:10000 U/g

            ·Cleanert® PAX,500 mg/6 mL(P/N:AX5006)

            實 驗

            部分

            樣品處理

             

            樣品提取

            稱取1 g已均質好的山楂卷樣品,加入10 mL水和

            75 µL 果膠酶,渦旋混勻1 min,室溫避光放置過夜后,加入10 mL乙酸乙酯,渦旋混合2 min,6000 r/min離心5 min,取上層乙酸乙酯層至100 mL雞心瓶中。剩余水相再加入10 mL乙酸乙酯提取一次,合并兩次乙酸乙酯提取液,在40℃旋蒸至干,以5 mL乙酸溶液溶解殘留物,超聲1 min,待凈化。

             

            樣品凈化

            將Cleanert PAX小柱依次用6 mL甲醇,6 mL水

            活化平衡,將待凈化液全部轉移至小柱上,棄去流出液,再用6 mL乙酸銨溶液,6 mL水淋洗小柱,棄去流出液并抽干小柱15 min。加入8 mL甲醇洗脫,收集流出液置于40℃氮吹至剩余200 ~ 300 µL,用5%乙腈水溶液定容至1 mL,渦旋30 s溶解殘留物,過0.22 µm尼龍針式過濾器過濾,待檢測。

             

            實驗條件 (色譜條件)

            色譜柱:

            Venusil HLP C18,5 µm,4.6 × 250 mm;

            柱溫:40℃;

            流速:1.2 mL/min;

            進樣量:100 µL;

            波長:276 nm

             

             

            實驗

            部分

            結果與討論

             

            實驗結果

            由表2可知,采用Cleanert PAX結合高效液相色譜的方法檢測山楂卷中展青霉素,加標回收率為105.6%,能夠滿足檢測要求。由圖1 ~ 圖3可知,用Venusil HLP C18檢測山楂卷的加標樣品,分離效果良好。



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            實驗討論

            本實驗參照國標方法用PAX 150 mg/6 mL做山楂制品中的展青霉素,經標樣過柱發現此規格的小柱使用國標方法,僅能吸附50%的目標物,故加大小柱規格至500 mg/6 mL,回收率能夠滿足檢測要求。

             

            本實驗采用高效液相色譜檢測,由于山楂制品的雜質較多,普通的C18色譜柱對雜質和目標物的分離并不理想,后改用極性嵌合的HLP C18色譜柱,發現分離度有很大改善,目標物能和雜質分離。國標方法中建議山楂制品的檢測儀器為LC-MS/MS,所以本報告中的檢測方法僅供參考。

            結論

            本實驗建立了山楂卷中展青霉素的前處理方法,用Cleanert® PAX結合高效液相色譜對加標量為0.1 mg/kg的樣品進行了測定,加標回收率為105.6%,RSD小于10%,可以滿足檢測要求,且凈化效果良好,方法穩定。說明Cleanert® PAX可以用于山楂卷中展青霉素的檢測。

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