細胞凍存與復蘇

細胞凍存

1. 實驗前準備：細胞室及工作臺紫外線照射15min；培養液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒溫水浴箱37℃預熱備用；收集對數生長期細胞，在凍存前一天換液

2．用吸管吸出培養瓶中的細胞培養液，PBS清洗2遍吸出沖洗液，加入適量胰蛋白酶消化。

3. 適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。吸管吸取培養液吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。

4. 用吸管將培養液加入凍存管中，離心(1000r/min，10分鐘)。

5. 去上清液，加入與細胞懸液等量的凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻

6. 冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(或隔夜)---液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1h，以防止胞內冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

7．記錄每一個冷凍管的位置以確保在以后應用時能夠找到每一個冷凍管。

細胞復蘇

室內紫外消毒；培養基、PBS于37℃恒溫水浴預熱備用。
自液氮罐中取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，離心。
去上清，加入培養基，吹打，然后移入培養瓶中，用培養基清洗凍存管，清洗液也移入培養瓶中。
于培養瓶中加入適量培養基，放入CO2培養箱中培養
記錄復蘇日期；次日換液。