決定ELISA實驗成敗的關鍵-洗滌

很多人做ELISA實驗，覺得真簡單，無非就是加樣，保溫，洗滌等操作步驟。可是實驗結果經常不盡人意。今天小編就給大家總結一下ELISA實驗洗滌要點，掌握這些，實驗So easy！

洗滌在 ELISA 過程中不是反應聚，但卻是決定實驗成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。

聚苯乙烯待塑料對蛋白質的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。

在標本和結合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯（吐溫，Tween）一類物質即右達到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質，常作為助溶劑。

根據脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號，結合月桂酸的為聚山梨酯 20，在 ELISA 中為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結合的作用。

洗滌如過沒清洗干凈，特別在后一次，如有酶結合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標本內的非特異性 IgG 吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗體作用而產生干擾。

ELISA 板的洗滌一般可采用以下方法：

①吸干孔內反應液；

②將洗滌液注滿板孔；

③放置 2 min，略作搖動；

④吸干孔內液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數一般為 3～4 次，有時甚至需洗 5～6 次。