IMDM培養(yǎng)基的實(shí)際用途

1、細(xì)胞株的培養(yǎng)：所述細(xì)胞株為中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞，且以下簡(jiǎn)稱(chēng)為細(xì)胞；

將細(xì)胞以2*105—6*105cells/ml的數(shù)量接種于血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為37℃，5%二氧化碳的培養(yǎng)箱，得到細(xì)胞A；

測(cè)定細(xì)胞A的生長(zhǎng)曲線以及加入微量的促生長(zhǎng)因子后得到細(xì)胞A的生長(zhǎng)曲線；

所述促生長(zhǎng)因子為促生長(zhǎng)劑G-CSF-RCHP，且按0.2—0.4μl/ml添加至血清培養(yǎng)基。

2、細(xì)胞的收集：將生長(zhǎng)于血清培養(yǎng)基中的細(xì)胞A使用胰酶處理1—5分鐘后，收集細(xì)胞A于15ml的離心管中，1000rpm離心3分鐘，吸入37℃預(yù)熱的10ml無(wú)血清培養(yǎng)基溶液洗滌細(xì)胞一次，最終定容于體積5ml的無(wú)血清培養(yǎng)基中得到細(xì)胞B，并采用Trypan Blue染色計(jì)數(shù)細(xì)胞B，測(cè)定細(xì)胞B的數(shù)量。

3、6孔板的預(yù)處理：取PH值為7.0—7.2的1XBS溶液，稀釋濃度為1mg/ml的纖維鏈接蛋白，得到最終工作濃度為20—80μl/ml的混合溶液，再吸取1ml混合溶液加入6孔板，處理時(shí)間為15—60分鐘，即得到預(yù)處理6孔板。

4、細(xì)胞培養(yǎng)：將細(xì)胞B按2x10的5次方—6x10的5次方cells/ml的數(shù)量接種預(yù)處理6孔板中，再將細(xì)胞B依次在含有5%、2.5%、1.25%、0.1%胎牛血清的IMDM液體培養(yǎng)基中逐漸代替培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞B充滿(mǎn)貼壁成長(zhǎng)或經(jīng)隔夜培養(yǎng)生長(zhǎng)后即可替換為上述胎牛血清比例逐步減少的IMDM液體培養(yǎng)基，直至替換為無(wú)血清培養(yǎng)基；

同時(shí)通過(guò)顯微鏡觀察經(jīng)過(guò)隔夜培養(yǎng)的細(xì)胞B的形態(tài)，并根據(jù)細(xì)胞B生長(zhǎng)的情況，當(dāng)細(xì)胞B由貼壁生長(zhǎng)逐漸轉(zhuǎn)換為懸浮生長(zhǎng)，且細(xì)胞形態(tài)由弧形或梭形轉(zhuǎn)換為圓形，將懸浮的細(xì)胞B轉(zhuǎn)接未經(jīng)預(yù)處理的6孔板繼續(xù)培養(yǎng)，最終從生長(zhǎng)的細(xì)胞B中篩選懸浮細(xì)胞，并對(duì)篩選出的懸浮細(xì)胞抗體進(jìn)行檢測(cè)。