在保證ELISA有效檢測病原菌的前提下，快速、方便也是人生長激素ELISA的必要條件。人生長激素ELISA從加入待測抗原到得出結(jié)果，檢測大腸桿菌O157:H7共需要5h左右，而間接ELISA則需要7h(包被37℃，2h)或者17h(包被4℃guo夜)。本論文篩選出的人生長激素ELISA檢測大腸桿菌O157:H7省去封閉這一步驟。在間接ELISA測定抗原中，封閉一般是bi不可少的，因為包被不同濃度抗原不一定可以wan全覆蓋固相載體表面，如果不封閉，很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標二抗直接被吸附到固相載體上，產(chǎn)生非特異性顯色而使檢測結(jié)果偏高。但是對于雙抗體夾心ELISA來說，在包被捕獲抗體時已經(jīng)使固相載體飽和，已經(jīng)沒有多余的吸附力來吸附隨后加入的特異性抗體和酶標二抗，這都說明了人生長激素ELISA有不需要封閉的可能，通過正交試驗結(jié)果也證明不封閉可以達到理想實驗效果，而且還縮短了整個檢測流程和時間，說明只要酶標記物是高活性的并且操作時洗滌che底，不經(jīng)封閉也可得到滿意結(jié)果。人生長激素ELISA檢測法的特異性和靈敏性抗原抗體的結(jié)合實際上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點之間，由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。但這種特異性并不是的，假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu)，在抗原抗體反應(yīng)中可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)。本實驗以大腸桿菌O157:H7及其他菌株共10株作為抗原用來檢測本方法的特異性，結(jié)果顯示大腸桿菌O157:H7呈明顯陽性反應(yīng)，其余各菌株均呈陰性反應(yīng)，說明本方法對大腸桿菌O157:H7具有明顯的檢測特異性，而對所測定的其它菌株無交叉反應(yīng)。
人生長激素ELISA操作步驟
⑴將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
⑵加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
⑶加酶標抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
⑷加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。
根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
