德國(guó)IBL 肺炎支原體IgM ELISA試劑盒

時(shí)間：2011/10/27閱讀：2219

德國(guó)IBL肺炎支原體IgM ELISA試劑盒

（貨號(hào)：RE56681）

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1、應(yīng)用范圍

此ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎支原體IgM抗體的體外定性和定量檢測(cè)。

2、前言說(shuō)明

除病毒、冠狀病毒、流感病毒、副流感病毒或腺病毒外，肺炎支原體也是傳統(tǒng)感冒的致病因子。支原體屬于柔膜體綱。其六個(gè)真菌屬的共有特征是沒(méi)有細(xì)菌細(xì)胞避，滲透能力差，體積小。與革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌相比，其基因組明顯更小。它們依靠宿主細(xì)胞而生長(zhǎng)，個(gè)別如寄生蟲(chóng)一樣依靠宿主有機(jī)體而生長(zhǎng)。肺炎支原體是一種引起氣管支氣管炎和原發(fā)性非典型肺炎的致病菌。肺炎支原體感染通常可伴隨有續(xù)發(fā)性疾病，如梗塞、腦炎、慢性神經(jīng) 病和格林-巴利綜合征（GBS）。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，除冷凝集實(shí)驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)外，ELISA是一種靈敏度較高而且可區(qū)分不同免疫球蛋白的可選方法。在急性感染中，特異性IgA抗體比IgM產(chǎn)生得更有規(guī)律、更快。IgA濃度減少的時(shí)間比IgM要早，或是說(shuō)比后來(lái)的IgG增加反應(yīng)要早。各種各樣的研究都表明，肺炎支原體三種免疫球蛋白的檢測(cè)對(duì)監(jiān)測(cè)其臨床發(fā)展進(jìn)程是非常有必要的。

3、實(shí)驗(yàn)原理

此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔內(nèi)包被了抗原，用對(duì)人IgM有特異性的酶標(biāo)抗體來(lái)檢測(cè)樣品中的特異性抗體（此抗體可結(jié)合到包被抗原上）。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色的強(qiáng)度與檢測(cè)到的IgM特異性抗體的量正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。

4、試劑盒組成：

4×2ml	標(biāo)準(zhǔn)品A-D	1；10；35；125U/mL，待用標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品D=陽(yáng)性質(zhì)控內(nèi)含抗支原體的IgM抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩(wěn)定劑。
1×14ml	酶標(biāo)IgM	紅色，待用。內(nèi)含過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgM，蛋白緩沖液，穩(wěn)定劑。
1×12×8	包被板	可拆，包被有特異性抗原。
1×14ml	TMB底物液	含TMB
1×14ml	TMB終止液	0.5M的H₂SO₄
1×60ml	稀釋液	含PBS緩沖液，＜0.1%NaN₃
1×60ml	濃縮洗滌液	濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20
2×	粘性金屬板	用于在溫育時(shí)遮蓋包被板
1×	塑料袋	用于儲(chǔ)存不用的板條

5、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供

1） RF吸附劑

2）移液器，體積：5；50；100；500 µL

3）校準(zhǔn)儀

4）樣品稀釋用試管（1ml）

5）帶試劑儲(chǔ)器8道移液器

6）洗滌瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)

7）能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

8）雙蒸水或去離子水

9）吸水紙，取樣吸頭和計(jì)時(shí)器

6、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明

6.1成分準(zhǔn)備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩(wěn)定性
60ml	洗滌液	加600ml	雙蒸水	1：10	加熱至37°C以溶解結(jié)晶，充分混合	2-8°C	8周

6.2樣品稀釋

樣品	稀釋	稀釋液	比例	備注
血清/血漿	全部稀釋	稀釋緩沖液	1：101	例：5µL+500µL

6.3用RF吸附劑處理：

注意	為了避免特異性IgG和類(lèi)風(fēng)濕因子的干擾，病人的血清應(yīng)當(dāng)用RF吸附劑處理（RE59059）。標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品千萬(wàn)不要用RF吸附劑處理。
1.	在400µL按1：101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
2.	室溫（18-25℃）下溫育≥1min（＜15min）

為了避免吸附特異性抗體，應(yīng)當(dāng)避免溫育時(shí)間＞15min。

預(yù)處理的樣品可能會(huì)是渾濁的。

7、實(shí)驗(yàn)步驟：

1）加100µL標(biāo)準(zhǔn)品和已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測(cè)中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。

2）封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3）移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4）在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。

5）封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6）移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí)，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7）每孔加TMB底物液100µL。

8）室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9）在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí)，顏色藍(lán)色變成黃色。

10）加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm（參考波長(zhǎng)：600-650nm）處測(cè)OD值。

8、結(jié)果計(jì)算

在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì) 數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測(cè)得的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明所述對(duì)樣品進(jìn) 行稀釋?zhuān)⒅匦聶z測(cè)。

9、結(jié)果判定：

＞ 12 U/ml 為陽(yáng)性

8 - 12 U/ml 為可疑

＜ 8 U/ml 為陰性

此檢測(cè)結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素，它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。

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