激素六項之卵泡刺激素（FSH）ELISA試劑盒使用說明書

卵泡刺激素（FSH）ELISA試劑盒

（德國DRG：EIA-1288）

1、應用范圍

DRG公司的卵泡刺激素酶免試劑盒可用于血清中FSH（卵泡刺激素）的定量檢測。此檢測試劑盒僅供體外診斷用。

2、前言說明

FSH和LH兩者密切的控制著性腺組織的生長和的繁殖活動，性腺組織通過負反饋的構效關系合成和分泌雄性激素和雌性激素。FSH是垂體前葉嗜堿細胞分泌的一種糖蛋白。下丘腦產生的促性腺激素釋放激素（GnRH）可控制垂體前葉FSH的釋放。和其它糖蛋白一樣，如：LH、TSH和HCG，FSH由兩個亞單位組成，分別為α和β。這種類型的激素其α亞單位在結構上都非常類似，因此每一激素的生物學和免疫學活性主要依賴于其β亞單位的*性。在女性中，FSH直接作用于粒細胞的受體而刺激卵泡的生長和成熟；從而增加卵泡類固醇激素的分泌和LH的產生。產生的LH之后結合到卵泡膜細胞上并刺激類固醇的分泌。在接近卵泡成熟時，卵巢內雌二醇的水平就開始增加，于是雌二醇的刺激作用可增加FSH受體的活性和FSH卵泡性結合。因此，在女性中，FSH、LH和雌二醇密切相連促進卵巢的發育和成熟。在絕經后、閹割和卵巢早衰的情況下，FSH的水平會表現為提高。通過雌激素的調節（雌激素表現的是一種負反饋機制），FSH的水平可能會變得規范化。FSH和LH、FSH和雌激素之間關系的不正常與神經性食欲缺乏癥和多囊卵巢并相關聯。當FSH隨機抽樣的濃度超過10mIU/mL時表明患有卵巢衰竭疾病的這一觀點，人們對此存在著明顯的異議。男性中，生精小管的發育和精子發生的維持同樣會受到FSH的調節。然而和雌激素不一樣，雄性激素并不會降低FSH的水平，因此它僅與血清LH之間表現為負反饋的關系。因為對FSH還不是*了解，但人們發現精子的男性通常FSH水平會提高。如通過放免檢測得到的結果：睪丸癌一般會降低血清FSH濃度，而提高LH濃度。因此人們推測：LH濃度的明顯增加可能是通過與由睪丸癌分泌的hCG樣物質的交叉反應所造成的。在原發性睪丸功能障礙和克氏綜合征男性患者中，我們可發現高濃度的FSH水平。 FSH濃度的提高同樣也出現在饑餓、腎功能衰竭、甲狀腺功能亢進和肝硬化的情況下。

3、實驗原理

   DRG公司的FSH酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶聯免吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結合FSH分子上*抗原位點的單克隆抗體。一份含有內源性FSH的病人樣本在包被孔中與酶聯物進行孵育，該酶聯物是一種聯結有辣根過氧化物酶的抗FSH抗血清。孵育后，用洗滌液洗去未結合的酶聯物。結合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中FSH的濃度成正相關。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中FSH的濃度成正比。

4、試劑盒成分

1）      微量反應板，1塊 （ 96孔） ，微孔中包被了抗FSH的單克隆抗體。

2）      酶聯物，1ml，內含抗辣根過氧酶標記的抗FSH抗血清。

3）      底物液，11ml （TMB）

4）      標準系列，6支（凍干粉），即: 0,5,10,20,50,100mIU/ml，轉換系數：1ng/ml=0.34mIU/ml。

5）      終止液:   0.5M的H2SO4,，6ml

5、實驗需要器材（但試劑盒不提供）

1）      酶標儀（450±10nm）。

2）      移液器

3）      吸水紙

4）      標準水箱

5）      蒸餾水

6、試劑貯存:

   未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內可以保持活性。不要使用過期試劑，酶聯物、底物溶液、標準品和零標準品必須在2—8℃下貯存。

   微孔反應板必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴封起來。如果包被板的包裝被打開，其免疫活性在6周內穩定，但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。

7、樣品的采集

1）      靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下用離心機分離血清，避免溶血。

2）      必須蓋住樣本并在實驗之前于２-８℃下可貯存48小時。樣品需要更長的貯存時間，則應將樣品凍存于-20℃的環境下。解凍的樣本在檢測之前必須上下倒置幾次。

注意：用于此試劑盒的樣品不能含有任何添加劑。

8、試劑的準備

參考標準：在凍干的標準品中加入1.0ml雙蒸水。

注意：配制好了的標準品可在2-8℃下穩定存放2個月。想要存放更長時間應當將其凍存于-20℃的環境下。

9、一般注意事項

1）      實驗開始前，將所有試劑和樣本都平衡至室溫,試劑混合時避免起泡。

2）      實驗一旦開始,所有的步驟應完整地進行下去。

3）      每一樣品的取樣都得使用新的取樣吸頭。

4）      吸光度與溫育時間和溫度有關，在實驗開始后所有的試劑都應準備好，以保證加液時間的一致。

5）      本試劑盒zui大吸光度（OD）在1.200-2.000之間（室溫22℃,顯色10分鐘以內）。如果zui大OD值高于您酶標儀的上限或低于1.000，則相應的減少或延長顯色反應的溫育時間。一般情況下，酶免反應的強度與時間和溫度成線性，這使得操作者應當適當的調整物理化學環境。

10、實驗步驟

1）      將所需數目的板條置于板架上。

2）      將黃體生成素標準系列（0；5；20；50；100；200ng/ml）、質控和血清樣本分別25μl加入到相應的微孔中，每一樣品都得使用新的取樣吸頭。

3）      加100μl的抗FSH酶聯物于各孔中。

4）      混勻10秒,此步驟中*混勻很重要。

5）      室溫溫育（22℃）30分鐘。

6）      棄去孔內的反應液。

7）      用蒸餾水洗板5次。

8）      在吸水紙上把板拍干。

9）      依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。

10）  室溫（22℃）溫育10分鐘。

11）  按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。

12）  10分鐘內在450nm波長讀吸光度。

11、結果計算

1）      計算每個標準品、質控品和病人樣本的平均吸光度值。

2）      用吸光度值作為縱坐標（y），濃度值作為橫坐標（x），以每個標準品的吸光度值對其相應的濃度值（mIU/ml）進行標繪，作一標準曲線。

3）      用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應的濃度。根據自己的實際經驗或計算機的功能，也可以采用其它的歸納方法進行計算。

4）      任何稀釋了的樣品在計算時都必須將相應的稀釋因子考慮進去。

12、參考值

我們強烈建議各個實驗市都建立自己的正常值和異常值。以下結果是以一定量正常人群的血液樣本為準得出的實驗結果：

    男性                    2.0—10

    女性  卵泡期            2.0—10

          循環中期          7.0—20

          黃體期            2.0--10

          絕經后女性        20—100

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靈敏度:zui小檢測卵泡刺激素濃度,1mIU/ml

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

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