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尿液中對硝基酚的檢測——UPLC-MS/MS法
對硝基酚是我國68 種優先控制污染物之一，也是種重點控制的污染物之一。廣泛的應用于農藥、制藥工業、殺蟲劑以及染料行業，具有致癌、致畸、致突變的潛在毒性。
目前硝基酚類的測定方法有氣相色譜法、液相色譜法、紫外分光光度法、熒光光譜法和毛細管電泳法等。氣相色譜法在定量分析時，常需要用已知物純樣品對檢測后輸出的信號進行校正，分光光度法準確度不高，以上方法都普遍存在靈敏度不足的明顯缺憾。液相色譜與串聯質譜的聯用則能避免這一問題。
方法優勢：
迪馬科技開發的《尿液中對硝基酚的檢測》，采用固相萃取-超液相色譜串聯質譜法測定人尿中的對硝基酚，以濃鹽酸作為提取液，采用ProElut PXL 固相萃取柱凈化樣品，通過UPLC-MS/MS檢測；方法定量限是5 μg/kg。本方案前處理步驟簡單、凈化效果好，基質效應小且檢測時間短；準確度高，重現性好。
柱優勢：
ProElut PXL 柱填料由多種吸附劑按照一定的比例分層填裝而成，采用多種作用機理去除尿液中尿酸、尿素等雜質，適用于尿液中對硝基酚的檢測。本產品是商品化的成品柱，吸附劑穩定性好，不受外界環境因素影響，保證實驗結果的重現性和準確性；過柱過程中操作步驟簡單，有機溶劑用量少，減少對人體的危害同時提高工作效率。
以下為詳細解決方案，敬請參考！
尿液中對硝基酚的檢測——UPLC-MS/MS法
1、適用范圍
本方案適用于尿液中對硝基酚的檢測，本方法定量限是5 μg/kg。
2、提取
取10 g樣品，加入2 mL濃鹽酸，沸水浴60 min，冷卻至室溫，待凈化。
3、凈化——ProElut PXL 3 mL（Cat#：65920）
a活 化： | 加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液棄去； |
b上 樣： | 將待凈化液加入小柱，流出液棄去； |
c淋 洗： | 加入3 mL 30%甲醇水淋洗小柱，流出液棄去； |
d洗 脫： | 加入3 mL 80%甲醇水，收集洗脫液，并用水定容至10 mL，過微孔濾膜供LC-MS分析。 |
4、分析條件
4.1 UPLC條件
色譜柱：Leapsil C18，100 x 2.1mm，2.7 μm（Cat#：86005）
流 速：0.3 mL/min
進樣量：5 μL
柱 溫：35 ℃
流動相：10 mmol/L乙酸銨：乙腈=8：2
4.2 質譜條件
電離模式：ESI 掃描方式： 負離子掃描
描檢測方式：多反應監測 電噴霧電壓：-4500 V
霧化氣壓力：50 psi 輔助氣壓力：50 psi
氣簾氣壓力：20 psi 離子源溫度：500 ℃
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
化合物名稱 | 定性離子對 (m/z) (母離子/子離子) | 定量離子對 (m/z) (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/ev | 去簇電壓/V |
對硝基酚 | 138.0/107.8 | 138.0/107.8 | -24.7 | -63 |
138.0/92.2 | -30.0 | -63 |
5、添加回收結果
人尿中對硝基酚的HPLC檢測添加回收結果
分析物 | 添加水平(μg/kg) | 回收率(%) |
對硝基酚 | 5 | 100.96 |
20 | 102.48 | |
100 | 99.37 |
對硝基酚10.0 μg/L MRM色譜圖
對硝基酚標準10.0 μg/L XIC色譜圖
尿液中對硝基酚的檢測——UPLC-MS/MS法相關產品信息：
貨號 | 名稱 | 規格 |
樣品前處理 | ||
65920 | ProElut PXL | 3 mL，50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用連接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
標準品 | ||
12-N-10855-5G | 對硝基酚[100-02-7] | 5 g |
色譜柱及保護柱 | ||
86005 | Leapsil C18 UHPLC/HPLC兼容反相色譜柱 | 100 x 2.1mm，2.7 μm |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
50138 | 乙酸銨 HPLC級 | 100 g |
通用色譜產品 | ||
52401B | 瓶架/藍色（現貨） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（現貨） | 50孔 |
1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經組裝） | 100/pk |
H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL |
紅色產品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*