本研究建立了纈沙坦膠囊中13種亞硝胺雜質的測定方法。采用島津基毒專用柱ShimNex S-GTIs進行分離，島津串聯質譜LCMS-8050檢測分析。結果顯示，13種亞硝胺雜質峰型良好，且NDPA和NDIPA、NDBA和NDIBA、NDMA和DMF的分離度均達到1.5以上。該方法可為纈沙坦膠囊中13種亞硝胺雜質的測定提供參考。
1. 實驗部分
實驗儀器及耗材
Shimadzu LC-30A 與 LCMS-8050 聯用系統；
色譜柱：ShimNex S-GTIs（3 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01247-31）；
Ghost Trap鬼峰捕集柱（柱芯：P/N 228-59921-91；柱套：P/N 380-01259-99）
純水機：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Disc HPPTFE針式過濾器（P/N：380-00341）；
LC/MS認證樣品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
Nichipet Air移液槍：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；
Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）；
Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；
Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-100006）。
溶液的制備
1.2.1
對照品溶液的制備
分別準確稱取13種亞硝胺雜質對照品適量，加水溶解并稀釋至1000 μg/mL，得到各雜質的單標溶液；分別取各雜質單標溶液適量，加水制成1 ng/mL的13種亞硝胺雜質混標溶液，備用。
1.2.2
供試品溶液的制備
精密稱取適量纈沙坦膠囊內容物，置于離心管中，加入1.6 mL甲醇，渦旋使溶解，超聲10 min，加6.4 mL水，渦旋混勻，超聲10 min，6000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。最終濃度以 API 計為 10 mg/mL。
1.2.3
供試品加標溶液的制備
精密稱取適量樣品，置于離心管中，加入含量為0.1 mg/kg的13種亞硝胺類物質混合對照品溶液，加入1.6 mL甲醇，渦旋使溶解，超聲10 min，加6.4 mL水，渦旋混勻，超聲10 min，6000 r/min離心5min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，作為供試品加標溶液。最終濃度以 API 計為 10 mg/mL。
?分析條件
UHPLC條件
色譜柱：ShimNex S-GTIs（3 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01247-31）
流 速：0.8mL/min
進樣量：10 μL
柱 溫：60 ℃
切閥程序：0 min（MS）→ 17.6 min（廢液）→ 18.4 min（MS）
流動相：A：0.1%甲酸水
B：0.1%甲酸甲醇
梯度程序如下：
質譜條件
離子化模式：APCI，正離子掃描
掃描模式：多反應監測 (MRM)
碰撞氣：氬氣
接口電壓：4.5 kV
霧化氣：氮氣 3 L/min
干燥氣：氮氣 5 L/min
接口溫度：350℃
DL溫度：150 ℃
加熱模塊溫度：200 ℃
各化合物MRM參數見下表
2. 實驗結果
纈沙坦膠囊供試品溶液、13種亞硝胺雜質混合對照品溶液色譜圖如下：
為了避免高濃度的纈沙坦成品藥物進入質譜，造成污染，實驗中通過調整液相洗脫程序，實現13種亞硝胺雜質與纈沙坦藥物進行分離，通過二位流通閥，17.6~18.4 min出峰時間內切入廢液，18.4~30 min切回質譜，進行質譜監控，由于不同色譜系統的延遲體積的差異，13種亞硝胺雜質與纈沙坦的保留時間會發生變化，建議配置紫外檢測器進行色譜圖的監控。
3. 結論
本研究建立了纈沙坦膠囊中13種亞硝胺雜質的測定方法。采用島津基毒專用柱ShimNex S-GTIs進行分離，島津串聯質譜LCMS-8050檢測分析。結果顯示，13種亞硝胺雜質峰型良好，且NDPA和NDIPA、NDBA和NDIBA、NDMA和DMF的分離度均達到1.5以上。該方法可為纈沙坦膠囊中13種亞硝胺雜質的測定提供參考。
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