寡核苷酸生產(chǎn)過(guò)程中的異常情況會(huì)導(dǎo)致形成常見(jiàn)雜質(zhì)，例如缺失一個(gè)或多個(gè)核苷以及超過(guò)預(yù)期核苷酸 (N+1 ， N+2 等) 的長(zhǎng)鏈寡核苷酸，雜質(zhì)性質(zhì)與主成分非常接近，所以分離分析十分具有挑戰(zhàn)性。
上一期我們探討了反相離子對(duì)分離分析寡核苷酸。于此同時(shí)，由于寡核苷酸由于其帶負(fù)電的磷酸骨架，可通過(guò)陰離子交換色譜進(jìn)行寡核苷酸分析檢測(cè)，基于帶負(fù)電荷的磷酸糖骨架與帶正電荷的鍵合固定相相互作用，目標(biāo)分子吸附在固定相，通過(guò)增加流動(dòng)相的離子強(qiáng)度使得寡核苷酸被洗脫，實(shí)現(xiàn)良好的保留和分離效果。所以離子交換色譜法是分離寡核苷酸的一種常用技術(shù)。
Shim-pack
Bio IEX Q-NP
Shim-pack Bio IEX Q-NP采用聚合物材料，使得流動(dòng)相耐受性更強(qiáng)，耐受寬pH值，無(wú)孔基質(zhì)使得擴(kuò)散更小，峰形更尖銳；鍵合季銨基團(tuán)，鍵合技術(shù)使得分離效果優(yōu)異；良好的粒徑均一性使得色譜柱柱效更高。
可實(shí)現(xiàn)寡核苷酸 n、n-1 良好分離分析
針對(duì)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的寡核苷酸，具有選擇性企業(yè)性質(zhì)
適用于硫代磷酸酯（PS）寡核苷酸的分離分析
對(duì)于PO雜質(zhì)的分離分析展現(xiàn)優(yōu)異的分離效果
?
案例1：?jiǎn)捂湽押塑账醤，n-1雜質(zhì)分離
案例2：DNA片段雜質(zhì)分離分析
色譜柱使用
注意事項(xiàng)
根據(jù)樣品的吸附差異，在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中可以不同種類的緩沖液和洗脫鹽類型，因?yàn)樗鼈兌伎梢燥@著影響峰形和分辨率。
可以選擇不同的pH鹽，例如Tris-HCl 、NaOH緩沖液與NaCl或者NaClO4搭配使用。
一般情況下，目標(biāo)樣品以20 ~ 50 mM的緩沖溶液為弱洗脫流動(dòng)相，此時(shí)通常樣品待測(cè)物吸附到色譜柱上，然后通過(guò)鹽濃度梯度（NaCl或者高氯酸鈉進(jìn)行洗脫，濃度一般通過(guò)梯度增加到0 ~ 0.5 M左右，有的時(shí)候可能更高），或pH梯度洗脫。 建議每次運(yùn)行時(shí)用含有1m NaCl的緩沖溶液清洗色譜柱，以去除殘留在柱上的雜質(zhì)，這些雜質(zhì)在最終流動(dòng)相中沒(méi)有被洗脫。
高pH條件以及高柱溫可以有效提升分辨率。但是如果樣品的穩(wěn)定性較差，則推薦使偏中性洗脫液，溫度40℃條件下分離
PS修飾的寡核苷酸的保留大大增加，對(duì)于PS修飾寡核苷酸的純化，高pH和離子強(qiáng)度有利結(jié)合分子的洗脫，洗脫流動(dòng)相選擇NaClO4更合適。
一般來(lái)說(shuō)，通過(guò)離子交換進(jìn)行生物分子的分離分析，采用的是水相緩沖體系，但對(duì)于寡核苷酸的純化，對(duì)分離效率要求較高。在流動(dòng)相中加入有機(jī)改性劑可以改變分離效果，一般不超過(guò)30%
不要使用含有氧化劑的溶劑作為流動(dòng)相。
色譜柱保存在20 mM Tris-HCl buffer (pH 8.1)中。
色譜柱柱溫最高不要超過(guò)60℃使用，
色譜柱耐受的pH范圍是2-12。
脂溶性物質(zhì)和弱極性物質(zhì)可能吸附到色譜柱上，導(dǎo)致停留時(shí)間、峰形 和壓力的變化。在這些情況下，按照程序洗滌色譜柱：依次使用(1) 0.2 N NaOH水溶液/乙腈（80/20）；(2) 1 M醋酸水溶液；(3)加入非離子表面活性劑的流動(dòng)相；(4)流動(dòng)相為6m鹽酸胍，依次沖洗4-5mL。每次沖洗溶劑注入清洗后，檢查 保留時(shí)間和峰形是否恢復(fù)。
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