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            研域(上海)化學試劑有限公司

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            人 (Human) 多巴胺 (Dopamine) ELISA 檢測試劑盒說明書

            時間:2013/10/22閱讀:703
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              研域(上海)化學試劑有限公司
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            (Human) 多巴胺 (Dopamine) ELISA 檢測試劑盒
            本試劑僅供研究使用      標本:血清或血漿
             
            試驗原理
            Dopamine試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Dopamine濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Dopamine和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Dopamine的濃度呈比例關系。
             
            試劑盒內容及其配制

            試劑盒成份(2-8℃保存)
            96孔配置
            48孔配置
            配制
            96/48人份酶標板
            1塊板(96T
            半塊板(48T
            即用型
            塑料膜板蓋
            1
            半塊
            即用型
            標準品:800nmol/L
            1瓶(0.6ml
            1瓶(0.3ml
            按說明書進行稀稀
            空白對照
            1瓶(1.0ml
            1瓶(0.5ml
            即用型
            標準品稀釋緩沖液
            1瓶(5ml
            1瓶(2.5ml
            即用型
            生物素標記的抗Dopamine抗體
            1瓶(6ml
            1瓶(3.0ml
            即用型
            親和鏈酶素-HRP
            1瓶(10ml
            1瓶(5.0ml
            即用型
            洗滌緩沖液
            1瓶(20ml
            1瓶(10ml
            按說明書進行稀釋
            底物A
            1瓶(6.0ml
            1瓶(3.0ml
            即用型
            底物B
            1瓶(6.0ml
            1瓶(3.0ml
            即用型
            終止液
            1瓶(6.0ml
            1瓶(3.0ml
            即用型
            標本稀釋液
            1瓶(12ml
            1瓶(6.0ml
            即用型

             
            自備材料
            1. 蒸餾水。
            2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul
            3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
             
            安全性
            1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
            2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
            3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
             
            操作注意事項
            1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
            2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
            3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
            4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
            5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
            6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
            7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
            8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
            9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
             
            樣品收集、處理及保存方法
            1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
            2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
            3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
            4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
            5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
             
            試劑的準備
            1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

            800 nmol/L
            (6號標準品)
            原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
            400 nmol/L
            (5號標準品)
            100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
            200 nmol/L
            (4號標準品)
            100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
            100 nmol/L
            (3號標準品)
            100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
            50 nmol/L
            (2號標準品)
            100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
            25 nmol/L
            (1號標準品)
            100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
            0 nmol/L
            (空白對照)
            原始濃度不用稀釋直接加入50ul

             
            2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
             
             
            操作步驟
            1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
            2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
            3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

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