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無血清培養(yǎng)很難？選對微孔板可以幫大忙

閱讀：295 發(fā)布時(shí)間：2024-8-23

轉(zhuǎn)染，是真核細(xì)胞主動或被動導(dǎo)入外源基因片段的過程，研發(fā)人員通過該技術(shù)研究基因、觀測蛋白表達(dá)，亦可以特異性增強(qiáng)/抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的外源基因不整合入細(xì)胞基因組，因此表達(dá)時(shí)間有限，不能傳給子代細(xì)胞；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是通過病毒載體等方法將外源性DNA/基因?qū)爰?xì)胞，并整合至細(xì)胞基因組，參與細(xì)胞基因組復(fù)制，可經(jīng)過篩選得到長期穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。

正常培養(yǎng)基中的血清含有核酸酶，會降解外源DNA，此外，血清中其它不確定成分或蛋白因子易與核酸形成復(fù)合物，影響轉(zhuǎn)染效率。因此，使用無血清或低血清的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并在轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成的過程中嚴(yán)格限制血清的使用，可以保證轉(zhuǎn)染的有效性。

在無血清環(huán)境中，細(xì)胞的活力、貼壁能力和增殖能力下降，為了減少無血清環(huán)境給細(xì)胞造成的負(fù)面影響，BRAND研發(fā)出經(jīng)特殊修飾的細(xì)胞培養(yǎng)板表面，cellGrade^TM premium表面支持細(xì)胞貼壁，并提高轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖量。

不同表面處理的細(xì)胞培養(yǎng)板

不同的細(xì)胞培養(yǎng)板對比試驗(yàn)

狀態(tài)良好的HEK293.EBNA細(xì)胞以相同數(shù)量種板至BRAND cellGrade^TMpremium的黑色、底部透明的96孔培養(yǎng)板中，和另外2個(gè)廠家同類型的培養(yǎng)板做對比。細(xì)胞種板培養(yǎng)24小時(shí)后，用每孔200 ng的GFP編碼質(zhì)粒-DNA pEGFP-C1轉(zhuǎn)染細(xì)胞，轉(zhuǎn)染試劑為40 kDa聚乙烯亞胺（PEI 40），DNA:PEI=1:3，72小時(shí)后，使用電動移液器以相等低速移取并棄去培養(yǎng)基，并用200 μL PBS洗板2次，檢測ex485/em535 nm處的剩余相對熒光單位（RFU）。

本實(shí)驗(yàn)控制了細(xì)胞品質(zhì)、培養(yǎng)條件、接種量、轉(zhuǎn)染條件、檢測條件等的一致性，唯一的變量是采用不同廠家表面處理的細(xì)胞培養(yǎng)板，結(jié)果如圖2所示，從中可以看出，BRAND cellGrade^TMpremium表面處理的細(xì)胞培養(yǎng)板對轉(zhuǎn)染GFP表達(dá)細(xì)胞的生長、貼附和增殖有良好的促進(jìn)效果。

轉(zhuǎn)染細(xì)胞HEK293.EBNA 的GFP相對熒光單位結(jié)果

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