公司開展培訓專業光學顯微鏡成像原理

       物體介于物鏡的焦距和二倍焦距之間，成倒立放大的實相，據凸透鏡成像規律，知實相在異側二倍焦距之外。實相位于目鏡焦點或者焦點之內，被再次放大，形成放大的虛像。而人的眼睛是可以看到虛像的（這個原理自然清楚）。要搞清顯微鏡的使用原理，就得對物理中的凸透鏡成像有所理解。

　　只有當物體對人眼的張角不小于某一值時，肉眼才能區別其各個細部，該量稱為目視分辨率。在*條件下，即物體的照度為50~70lx及其對比度較大時， 可達到1'。為易于觀測，一般將該量加大到，并取此為平均目鏡分辨率物體視角的大小與該物體的長度尺寸和物體至眼睛的距離有關。有公式y=Lε

　　距離L不能取得很小，因為眼睛的調節能力有一定限度，尤其是眼睛在接近調節能力的極限范圍工作時，會使視力極度疲勞。對于標準(正視)而言，*的視距規 定為250mm(明視距離)。這意味著，在沒有儀器的條件下，目視分辨率ε=2'的眼睛，能清楚地區分大小為0.15mm的物體細節。

　　在觀測視角小于1'的物體時，必須使用放大儀器。放大鏡和顯微鏡是用于觀測放置在觀測人員近處應予放大的物體的。

　?。ㄒ唬?放大鏡的成像原理
表面為曲面的玻璃或其他透明材料制成的光學透鏡可以使物體放大成像，光路圖如圖1所示。位于物方焦點F以內的物AB，其大小為y，它被放大鏡成一大小 為y'的虛像A'B'。
　　放大鏡的放大率Γ=250/f'式中250--明視距離，單位為mm f'--放大鏡焦距，單位為mm 該放大率是指在250mm的距離內用放大鏡觀察到的物體像的視角同沒有放大鏡觀察到的物體視角的比值。

　　（二） 顯微鏡的成像原理
　　顯微鏡和放大鏡起著同樣的作用，就是把近處的微小物體成一放大的像，以供人眼觀察。只是顯微鏡比放大鏡可以具有更高的放大率而已。

　　圖2是物體被顯微鏡成像的原理圖。圖中為方便計，把物鏡L1和目鏡L2均以單塊透鏡表示。物體AB位于物鏡前方，離開物鏡的距離大于物鏡的焦距，但小 于兩倍物鏡焦距。所以，它經物鏡以后，必然形成一個倒立的放大的實像A'B'。 A'B'位于目鏡的物方焦點F2上，或者在很靠近F2的位置上。再經目鏡放大為虛像A''B''后供眼睛觀察。虛像A''B''的位置取決于F2和 A'B'之間的距離，可以在無限遠處（當A'B'位于F2上時），也可以在觀察者的明視距離處（當A'B'在圖中焦點F2之右邊時）。目鏡的作用與放大鏡 一樣。所不同的只是眼睛通過目鏡所看到的不是物體本身，而是物體被物鏡所成的已經放大了一次的像。

　?。ㄈ?顯微鏡的重要光學技術參數
在鏡檢時，人們總是希望能清晰而明亮的理想圖象，這就需要顯微鏡的各項光學技術參數達到一定的標準，并且要求在使用時，必須根據鏡檢的目的和實際情況 來協調各參數的關系。只有這樣，才能充分發揮顯微鏡應有的性能，得到滿意的鏡檢效果。
顯微鏡的光學技術參數包括：數值孔徑、分辨率、放大率、焦深、視場寬度、覆蓋差、工作距離等等。這些參數并不都是越高越好，它們之間是相互又相互 制約的，在使用時，應根據鏡檢的目的和實際情況來協調參數間的關系，但應以保證分辨率為準。

　　1． 數值孔徑
數值孔徑簡寫NA，數值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術參數，是判斷兩者（尤其對物鏡而言）性能高低的重要標志。其數值的大小，分別標刻在物鏡和聚光鏡 的外殼上。
數值孔徑（NA）是物鏡前透鏡與被檢物體之間介質的折射率（n）和孔徑角（u）半數的正弦之乘積。用公式表示如下：NA=nsinu/2 孔徑角又稱"鏡口角"，是物鏡光軸上的物體點與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度?？讖浇窃酱螅M入物鏡的光通亮就越大，它與物鏡的有效直徑成正比， 與焦點的距離成反比。顯微鏡觀察時，若想增大NA值，孔徑角是無法增大的，*的辦法是增大介質的折射率n值?；谶@一原理，就產生了水浸物鏡和油浸物鏡，因介質的折射率 n值大于1，NA值就能大于1。

　　數值孔徑zui大值為1.4，這個數值在理論上和技術上都達到了極限。目前，有用折射率高的溴萘作介質，溴萘的折射率為1.66所以NA值可大于 1.4。

　　這里必須指出，為了充分發揮物鏡數值孔徑的作用，在觀察時，聚光鏡的NA值應等于或略大于物鏡的NA值。數值孔徑與其他技術參數有著密切的關系，它幾乎決定和影響著其他各項技術參數。它與分辨率成正比，與放大率成正比，與焦深成反比，NA值增大，視場寬 度與工作距離都會相應地變小。OLYMPUS現在推出了世界的物鏡設計理念與的精密加工技術使50倍物鏡的數值孔徑在0.8的情況下工作距 離達到1毫米100倍物鏡的數值孔徑在0.9的情況下工作距離達到1毫米這幾乎是一個接近于理論的數值.

　　2． 分辨率
    顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區分的兩個物點的zui小間距，又稱"鑒別率"。其計算公式是σ=λ/NA式中σ為zui小分辨距離；λ為光線的波長；NA為物鏡的數值孔徑?？梢娢镧R的分辨率是由物鏡的NA值與照明光源的波長兩個因素決定。NA值越大，照明光線波 長越短，則σ值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即減小σ值，可采取以下措施

　　（1） 降低波長λ值，使用短波長光源。

　?。?） 增大介質n值以提高NA值（NA=nsinu/2）。

　?。?） 增大孔徑角u值以提高NA值。

　　（4） 增加明暗反差。

　　3． 放大率和有效放大率
由于經過物鏡和目鏡的兩次放大，所以顯微鏡總的放大率Γ應該是物鏡放大率β和目鏡放大率Γ1的乘積：Γ=βΓ1 顯然，和放大鏡相比，顯微鏡可以具有高得多的放大率，并且通過調換不同放大率的物鏡和目鏡，能夠方便地改變顯微鏡的放大率。 放大率也是顯微鏡的重要參數，但也不能盲目相信放大率越高越好。顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率。