BAS與酶聯免疫試劑盒的結合

BAS酶聯免疫試劑盒吸附試驗是ELISA的一種改良技術，將BAS，即生物素-親和素系統引入ELISA，很大程度上提高了ELISA的靈敏度。

一、親和素和生物素

1.親和素：

       給動物飼喂大量卵白蛋白后，可引起生物素缺乏癥，此后證明，卵白蛋白中存在一種對生物素有異常親和力的堿性蛋白，稱之為抗生物素蛋白或卵白素，均稱為親和素。親和素存在于卵白蛋白中，故可從雞蛋白清中提取親和素，由四個相同的亞基組成的堿性糖蛋白，分子量6.6～6.8萬，等電點為10.5，由于每個亞基都可以結合一個生物素分子，所以親和素呈四價反應性，在血清學反應中，可以產生新的放大作用。

2.生物素：

       即維生素H，主要存在于卵黃、腎、肝等組織中，除可提取外，也能人工合成，另外在動植物體內也廣泛存在，系結構簡單的小分子物質，分子量244.31，它不能直接與親和素結合，需活化后，產生生物素衍生物（即生物素酰羥基丁二酰亞胺，BNHS，為白色結晶，熔點200～202℃）才能與親和素結合。另外，它還能高比度地偶聯抗體等反應物質和酶等標記材料，分別制成生物素化抗體和生物素化酶等，在免疫反應中起到一級穩定的放大作用。

二、BAS酶聯免疫試劑盒吸附試驗的技術類型，該檢測系統可分為以下兩類：

1.BAB法：

      即以游離的親和素分別橋聯生物素化抗體和生物素化酶的檢測方法。目前最-常用的是本法的改良法，預先使親和素與生物素化酶形成復合物，再使其與生物素化抗體反應，因而叫做ABC法，此法既減少了反應步驟，又因ABC網格結構可網絡數量極為可觀的酶分子，從而使BAS的靈敏度又得到了進一步的提高。

2.BA法：

       即直接以酶標親和素聯接生物素化抗體，檢測抗原的方法。為簡化反應程序，廠家試制了酶聯BAS試劑，連接被檢測的免疫反應系統是生物素化抗體，即生物素化抗抗體羊抗兔和兔抗小鼠及一種生物素化抗體生物素化馬抗人。較常用的生物素化酶是生物素化辣根過氧化物酶。

三、BAS ELISA在檢測工作中的應用：

該技術應用最多的一個方面就是檢測可溶性抗原如細菌和病毒等，以及它們相應的抗體。

1. 細菌性抗原的檢測Yolken等采用雙抗體夾心ABC ELISA法檢測流感桿菌b型、肺炎球菌和鏈球菌抗原等，先用相應抗體包被酶標板，然后分別加入細菌培養上清液、生物素化抗體和親和素與生物素化酶復合物來實施反應，本法檢測的靈敏度比常規ELISA和熒光抗體法高4～16倍。

2. 病毒性抗原的檢測病毒性抗原也可用雙抗體夾心法檢測，如檢出糞便中的輪狀病毒，可用抗體包板，再相繼加入待檢標本、生物素化抗體、親和素和3H標記的生物素，然后作放射免疫測定。國內已用BAS 酶聯免疫試劑盒吸附試驗檢測單純皰疹病毒、巨細胞病毒、肺炎病毒及其相應抗體。