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上海源葉生物科技有限公司
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炭疽流式細胞分析技術
2011-6-8 閱讀(1088)
流式細胞術（flow cytometry，F(xiàn)CM）是一種可以對細胞或亞細胞結(jié)構(gòu)進行快速測量的新型分析技術和分選技術。其特點是：
①測量速度快，zui快可在1s內(nèi)計測數(shù)萬個細胞；
②可進行多參數(shù)測量，可以對同一個細胞做有關物理特性、化學特性的多參數(shù)測量，并具有明顯的統(tǒng)計學意義；
③是一門綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術、計算機技術、流體力學、細胞化學、圖像技術等眾多領域的知識和成果；
④既是細胞分析技術，又是的分選技術。FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖（his-togram）、二維點圖（dot-plot）、二維等高圖（con-tour）、假三維圖（pseudo 3D）和列表模式1istmode）等。流式細胞儀分析技術是一種重要的免疫學技術平臺，可以實現(xiàn)快速敏感地檢測微生物。與傳統(tǒng)免疫熒光和ELISA檢測技術相比，它可以將散射信號（scatter signal）和熒光強度結(jié)合起來分析zui終結(jié)果，Stopa等用純芽孢試驗表明，與近緣菌株交Y-N．應的散射信號和熒光強度與同種反應的不同，這就增加了流式細胞儀分析技術的選擇性和特異性，降低了假陽性率，這一結(jié)論有待檢測現(xiàn)場標本驗證。用流式細胞分析技術的另一優(yōu)點就是可以進一步限制熒光強度在結(jié)果評價中的作用，我們可以限定一個區(qū)域內(nèi)必須出現(xiàn)熒光才能判斷為陽性，而不是單憑強度漂移來判定。但是，必須注意的是，當標本中含有大量待測細菌時（>107CFU／m1）會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象降低熒光強度。
用流式細胞儀分析細菌或芽孢前首先應確定待檢對象是否有自發(fā)熒光，研究表明，Sterne株有白發(fā)熒光，而Ames株和Vollum株則沒有自發(fā)熒光。還要測定熒光抗體結(jié)合物有無自發(fā)熒光。然后，就可以確定結(jié)合物對不同株的反應性略有差異。一般流式細胞分析技術能檢測103個／m1以上的細菌或芽孢。所用時間不等。Stopa等發(fā)展了一種僅用5min檢測炭疽芽孢桿菌芽孢的流式細胞分析技術，并且能區(qū)分芽孢的死活。Dang等研究了芽孢滅活方法對流式細胞儀檢測的影響。結(jié)果表明，無論是用多抗，還是用單抗，檢測的熒光都發(fā)生了漂移，但是單抗檢測信號明顯降低，相反，多抗檢測信號大大增加。
