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上海源葉生物科技有限公司
主營產品： S30260異硫氰酸胍,30259鹽酸胍,嗜熱菌蛋白酶 |
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瘋牛病IDEXXEIA檢測方法
2011-7-6 閱讀(940)
本方法（IDEXX HerdChek BSE EIA test）由美國IDEXX公司開發研制，是一種快速簡捷的酶聯免疫測定方法，2004年通過美國和歐盟認證。
該方法的原理是將牛腦組織制成勻漿懸液，用稀釋液處理組織懸液，將處理后的腦組織懸液加入到包被有能選擇性地捕獲PrPSc的化學聚合物（英國Microsens公司技術）的微孔板中，室溫孵育，洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的針對PrP分子保守區的單抗，TMB顯色，測定OD值，判斷結果。
本方法的敏感性為100％，特異性為99．99％。本方法的特點在于不需要蛋白酶K消化，無需離心，無需特別溫度的孵育，所有步驟都在室溫下進行，4．5h內出結果，無需豐富的實驗經驗，實驗廢物少，所需實驗空間小。
瘋牛病的IDEXXEIA檢測方法主要步驟如下。
（1）樣品準備 收集樣品（腦閂部組織），勻漿，用稀釋液稀釋勻漿液。
（2）捕獲PrPSc將稀釋好的勻漿液加入到BSE病原捕獲板中，由seprion親和配體捕獲。
（3）添加調節緩沖液 洗去捕獲板中未結合的樣品，加入調節緩沖液并孵育，使捕獲的PrPSc變性，以便充分暴露抗原位點。
（4）添加HRP標記的單抗 洗去調節緩沖液，加入HRP標記的單抗并孵育。標記了HRP的PrP單抗結合上PrPSc。
（5）添加底物和終止液 洗去未結合的單抗，加入底物并孵育。當有陽性時出現藍色，滴加HCl終止液終止反應，顏色則變成了黃色。
（6）讀值和分析 用酶標儀讀板，數值用IDEXXxChek軟件分析。
