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上海源葉生物科技有限公司
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IL-16的檢測
2012-5-5 閱讀(826)
即以前的淋巴細胞趨化因子（1ymphocytechemoattractantfactor，LCF）。主要由CD8+T淋巴細胞產(chǎn)生，對T淋巴細胞特別是CD4+細胞具有選擇性趨化作用。
（1）IL-16的誘生
1）分離PBMC，調(diào)整細胞濃度為3X106／mL，加入平底培養(yǎng)板中，置37℃5％C02溫箱培養(yǎng)。
2）加入血清素（serotonin，即5-羥色胺），使終濃度為10—4moL／L，培養(yǎng)24h，離心收獲上清用于IL-16活性檢測。
（2）IL-16的測定：可根據(jù)IL-16對淋巴細胞的趨化作用測定其活性。
1）用尼龍棉分離法分離外周血中T淋巴細胞。
2）用RPMI-1640培養(yǎng)液將分離的T細胞或CD4+T細胞配成5X106—lO7／mL。
3）取48孔趨化板，底板各孔加入30／uL不同稀釋度的標準品或待測樣品，并設(shè)培養(yǎng)液對照孔，均做3復孔。在培養(yǎng)板之上覆以8um孔徑的硝酸纖維素膜，小心讓膜與樣品溶液接觸，不能有氣泡及不讓各孔中的液體相混。
4）蓋上頂板并固定。用0．2mL培養(yǎng)液洗滌各上孔，洗去固定時可能濾人上孔的樣品溶液。在頂板各孔中加入50／uL（約2．5X105～5X105）細胞懸液，置37~C 5％C02溫箱中孵育3h，讓細胞從膜上面向下趨化運動。
5）小心取下膜，洗去膜上表面的細胞，并將膜下表面（粘附著趨化的細胞）向上置玻璃板上，固定細胞，用蘇木精染色細胞。
凸）在高倍顯微鏡下計數(shù)趨化的細胞，以對照孔每視野約10個細胞的濃度，計數(shù)5個視野的全部細胞。取3個重復孔細胞的平均數(shù)。結(jié)果以％表示：
趨化％=試驗孔細胞數(shù)／對照孔細胞數(shù)×100％
（3）注意事項：多種細胞因子具有趨化活性，如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等。可用針對不同細胞因子的中和抗體作中和實驗對照以了解趨化活性的特異性。實驗時可將適量的中和抗體與細胞因子樣品一起加入底板各孔中，37℃作用15min，然后蓋上頂板，加入細胞。如上進行趨化試驗，并比較中和抗體對照與試驗孔的結(jié)果可區(qū)分不同趨化因子的作用。
