實驗的所有步驟都必須經過優化，以便觀察到特異染色，并盡可能減少非特異的背景染色。這包括開展預實驗，以確定每個一抗的適當孵育條件。抗原親和純化的多克隆抗體的稀釋度通常低于單克隆抗體，但這些值必須根據經驗確定。
注意：為了獲得可靠特異的信號，應采用交叉反應性極少的高質量抗體。
1、一抗孵育的起始條件：

2、一抗孵育的優化：
   一抗濃度、稀釋液、孵育時間和溫度都影響了染色質量。這些變量需要針對每個抗體和樣品來優化，以便實現特異染色和低背景。優化通常是保持孵育時間和溫度不變，而改變抗體濃度，以確定何時獲得*信號和低背景噪音。例如，如果使用高親和力的抗體，那么相對較高的濃度可能需要較短的孵育時間。相反，較低的抗體濃度可能需要較長的孵育時間。人們通常采用較長的孵育時間，以確保抗體*滲透到體視學技術所用的組織切片。為了促進特異染色，較長時間的孵育通常在低溫下開展（即4°C vs 室溫）。
    上海恒遠生物科技有限公司坐落于美麗的上海，于2008年成立，是一家生物技術企業，主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的研發及銷售。主要產品有進口BIM/RD/TSZ ELISA試劑盒、NQBB/GIBCO/HYCLONE 血清、ABCAM抗體、SIGMA/SPECTRUM/AMRESCO 生物科研試劑、USP標準品、實驗耗材等。公司自成立以來一直以質量求生存，以信譽求發展的精神，精益求精，力求做到更好，全體員工孜孜不倦為國內科研事業單位以及高校等提供的產品服務！