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            技術(shù)文章

            何為ELISA邊緣效應(yīng)?

            閱讀:4280          發(fā)布時間:2020-8-19

                邊緣效應(yīng)的定義是酶標(biāo)板孔內(nèi)中心部分與酶標(biāo)板孔內(nèi)遠(yuǎn)離中心部分之間相比存在明顯的信號差異,一般歸因于兩個主要因素。

                孵育環(huán)境確實對實驗有影響嗎?

                是的。孵育時溫度不均會引起邊緣效應(yīng)。請嚴(yán)格按照推薦的溫度進(jìn)行孵育。如果條件允許,可以在能夠控溫的孵育器中進(jìn)行孵育。

                在使用之前將所有試劑平衡至室溫。(除非特別說明)

                在實驗開始之前檢查工作的環(huán)境溫度。如果曲線很平直,可能是由于工作環(huán)境溫度低于氣溫所致。

                在孵育末期我注意到蓋板一側(cè)突起來了,這是否會影響我的實驗結(jié)果? 

                蓋板如果使用不恰當(dāng)會導(dǎo)致邊緣效應(yīng)。

                使用96孔板的ELISA測定中,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”,即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,在實驗室的常規(guī)ELISA測定中,將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,板也升溫時,在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”,并且可提高測定的重復(fù)性。 

                Elisa試劑盒還有就是在試驗中,必定有運用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意:加樣不行太快,要防止加在孔壁上部,不行濺出和發(fā)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易致使非特異吸附。濺出會對附近孔發(fā)生污染。出現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。所以,有時分一份標(biāo)本用一樣的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,通常就是上述加樣及試劑的過錯所造成的。

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