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            技術文章

            人白介素17(IL-17)試劑盒使用說明書

            閱讀:2662          發布時間:2011-9-13

                人白介素17(IL-17)試劑盒使用說明書

             

            本試劑盒僅供研究使用。
            檢測范圍:                                                          96T
            0-20 ng/L
             
            使用目的:
            人白介素17(IL-17)試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中白介素17(IL-17)含量。
            實驗原理
            人白介素17(IL-17)試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素17(IL-17)水平。用純化的人白介素17(IL-17)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素17(IL-17)再與HRP標記的白介素17(IL-17)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素17(IL-17)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人白介素17(IL-17)濃度。
            試劑盒組成

            1
            30倍濃縮洗滌液
            20ml×1瓶
            7
            終止液
            6ml×1瓶
            2
            酶標試劑
            6ml×1瓶
            8
            標準品(40ng/L)
            0.5ml×1瓶
            3
            酶標包被板
            12孔×8條
            9
            標準品稀釋液
            1.5ml×1瓶
            4
            樣品稀釋液
            6ml×1瓶
            10
            說明書
            1份
            5
            顯色劑A液
            6ml×1瓶
            11
            封板膜
            2張 
            6
            顯色劑B液
            6ml×1/瓶
            12
            密封袋
            1個

            標本要求
            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
            人白介素17(IL-17)試劑盒操作步驟
            1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

            20 ng/L
            5號標準品
            150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
            10 ng/L
            4號標準品
            150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
            5 ng/L
            3號標準品
            150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
            2.5 ng/L
            2號標準品
            150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
            1.25 ng/L
            1號標準品
            150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

             2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
            3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
            4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
            5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
            6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
            7.         溫育:操作同3。
            8.         洗滌:操作同5。
            9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
            10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
            11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
            人白介素17(IL-17)試劑盒注意事項

            1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
            2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
            3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
            4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
            5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
            6.底物請避光保存。
            7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
            8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
            9.本試劑不同批號組分不得混用。
            10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
            保存條件及有效期
            1.人白介素17(IL-17)試劑盒保存:;2-8
            2.有效期:6個月
             

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