在ELISA實驗中我們經(jīng)常會碰到試劑盒變質(zhì)的問題，是什么原因?qū)е铝薊LISA試劑盒的變質(zhì)呢？接下來我就和大家說一說導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因有哪些。

 

導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因主要分為七種：

 

1、方法學(xué)的影響

　　ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的bu公平競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

 

2、試劑因素

　　不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過批檢的項目其檢測結(jié)果也會存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。 嚴格執(zhí)行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

3、樣本因素

　　標本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復(fù)凍融等。

 

4、操作因素

    ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。

 

5、灰區(qū)的設(shè)置

　　通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。

 

6、標本復(fù)查

ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準確性的可靠方法。

 

7、表示結(jié)果的常用方法

①定性測定。

②半定量測定，結(jié)果一般以滴度表示。

③定量測定，即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標準曲線。

 

以上七種導(dǎo)致變質(zhì)的情況我們只要多加注意，ELISA試劑盒變質(zhì)的原因基本上也就不會存在了。