78R180 Red Retrobeads™ IX (100 µl)

產(chǎn)品概述

RetroBeads Gamma Lumafuor是lumafuor公司第一款反向示蹤產(chǎn)品，也是唯1被證明有效的產(chǎn)品（該產(chǎn)品的有效性已被從無脊椎動(dòng)物到無脊椎動(dòng)物的數(shù)百篇研究論文證實(shí)）。

類別：產(chǎn)品內(nèi)容

Cas  ：78R180

大小：100微升

品牌：lumafluor 

示蹤產(chǎn)物體內(nèi)注射濃度高，不易擴(kuò)散，信號(hào)強(qiáng)，對(duì)活細(xì)胞或活體無毒，存活時(shí)間一年以上。它與以下大多數(shù)示蹤劑、原位雜交檢測技術(shù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)兼容。

部分產(chǎn)品信息如下：

紅色逆轉(zhuǎn)珠（100μl）

綠色逆向珠IX （100 μl）

紅色逆轉(zhuǎn)錄珠伽瑪IX（100μl）

本手冊總結(jié)了使用熒光乳膠微球（珠子）作為神經(jīng)元逆行示蹤劑的大多數(shù)程序。有關(guān)綠色珠子的信息，請參閱本手冊的末尾。有關(guān)更多詳細(xì)信息，請參閱Katz，L.C的以下論文

1.Katz，L.C.，Burkhalter，A.和Dreyer，W.D.熒光乳微球逆行神經(jīng)元Markerforinvivoandinvitros tudiesofvisual cortex.自然310 ：498-500（1984）

2.卡茨，L.C.和Iarovici，D.M.綠色熒光光層：新的逆行示蹤劑。神經(jīng)科學(xué)34 ：511-520（1990）

魯馬福爾高效復(fù)古珠操作說明

1、 包裝和稀釋：

Lumafuor的珠子被包裝在一個(gè)密封的小瓶中，濃縮的珠子懸浮在蒸餾水中。如果使用紅色磁珠作為神經(jīng)通路的反向示蹤，則推薦使用稀釋方法：1：4稀釋可用于大鼠視覺皮層，而不會(huì)降低磁珠熒光標(biāo)記的強(qiáng)度和質(zhì)量。但是，對(duì)于第一個(gè)實(shí)驗(yàn)，我們不建議使用稀釋的磁珠，而是使用原始溶液進(jìn)行注射示蹤。除蒸餾水外，NaCl和KCl等常規(guī)鹽溶液也可用作稀釋劑。如果使用綠色珠子，強(qiáng)烈建議使用不稀釋的儲(chǔ)備溶液。

2、 儲(chǔ)存：

為避免蒸發(fā)，珠子溶液應(yīng)在冰箱中儲(chǔ)存4度。不要凍結(jié)它！冷凍豆子將無用且無法使用。干燥的珠子也不能使用（不能重新懸浮），產(chǎn)品沒有明顯的使用壽命。如果需要存儲(chǔ)，它可以存儲(chǔ)數(shù)年。

3、 注射：

珠子最好使用壓力注射，如1ml漢密爾頓微注射器或氣動(dòng)注射系統(tǒng)。如果需要小面積顯微注射（30-50nl），可以使用末端直徑為30-50um的玻璃電極進(jìn)行注射，而直徑較大的玻璃電極可用于常規(guī)反向示蹤（注射體積0.1-0.3ul）。然而，即使在較高劑量下，磁珠也不會(huì)從注射部位顯著擴(kuò)散（通常小于1mm）。因此，為了盡可能完quan地標(biāo)記投射到更大細(xì)胞核的神經(jīng)元，需要多點(diǎn)注射。雖然磁珠帶負(fù)電，但不建議使用離子滲透法追蹤磁珠。

4、 生存時(shí)間：

在大多數(shù)恒溫脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中，檢測磁珠的最短有效時(shí)間為24小時(shí)。在48小時(shí)內(nèi)，標(biāo)記強(qiáng)度隨進(jìn)樣時(shí)間增加，48小時(shí)后熒光強(qiáng)度保持不變。在冷血?jiǎng)游镏校瑱z測珠子的推薦時(shí)間為1周。目前，尚未檢測到最長的珠子可檢測周期。然而，磁珠的熒光強(qiáng)度和質(zhì)量可以在體內(nèi)保持至少14個(gè)月不變，并且細(xì)胞可以被永jiu標(biāo)記。在動(dòng)物或神經(jīng)元中沒有發(fā)現(xiàn)珠子的毒性作用。

五、固定與治療：

標(biāo)準(zhǔn)的固定方法是：洗滌或灌注0.1mpbs并固定在4%多聚甲醛（0.1mpbs制劑，pH7.4）中。用戊二醛固定會(huì)產(chǎn)生大量的組織自發(fā)熒光，這會(huì)阻礙用珠子標(biāo)記的神經(jīng)元。而且，在戊二醛固定組織中不會(huì)完quan觀察到綠色珠子，因此應(yīng)盡可能避免。如果使用冷凍部分，則應(yīng)用PBS沖洗切片并用明膠涂層載玻片干燥。風(fēng)干后，載玻片應(yīng)用二甲苯透明1分鐘，然后用氟鑲或氪密封。氟卡特可以從atomrgic chemetals Corp.（紐約法明代爾）購買;克里斯塔隆可以從以下位置購買

Harleco（EM Industries，新澤西州吉布斯敦）。切片只能短時(shí)間暴露在乙醇或二甲苯中，但長期暴露（超過 5 分鐘）會(huì)損壞珠子。磁珠對(duì)甘油非常敏感，在甘油環(huán)境中會(huì)很快提取熒光。因此，不應(yīng)使用甘油密封劑。如果不可避免，可以使用水楊酸甲酯代替甘油作為密封劑。如果切片儲(chǔ)存在黑暗環(huán)境中，則用熒光珠標(biāo)記的細(xì)胞一年內(nèi)無法提取（但切片的熒光背景會(huì)增加）。到目前為止，還沒有珠子標(biāo)記組織涂有塑料材料的記錄。

觀察：

紅色珠子中的染料是羅丹明，因此可以使用所有與羅丹明匹配的熒光濾光片。尼康公司的一些老式羅丹明濾光片由于背景較高，可能無法觀察到熒光珠。一般來說，蔡司和萊茨的標(biāo)準(zhǔn)羅丹明過濾器可以獲得更好的觀察效果。大多數(shù)綠色熒光濾光片都能很好地觀察綠豆的熒光結(jié)果。將濾光片設(shè)置為熒光黃色可以獲得強(qiáng)烈的明亮熒光，但也帶來了很高的背景干擾。結(jié)果表明，比窄帶濾光片更寬波段的熒光濾光片可以獲得更強(qiáng)的熒光信號(hào)。經(jīng)過長時(shí)間的觀察和拍照，珠子的熒光沒有