您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)！ 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)！ 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
昆蟲細(xì)胞的保存培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
1. 將 3 ml 含 10％ 胎牛血清的昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基 TNM-FH 加入到一個(gè) 60 mm 組織培養(yǎng)皿或 25 cm2 培養(yǎng)瓶中。
2. 取出一支凍存 Sf 9 細(xì)胞的安瓿，迅速置于 37℃ 水浴，用手前后搖動(dòng)融化。當(dāng)安瓿的內(nèi)容物幾乎融化時(shí)，將安瓿浸入 70％ 乙醇，消毒外壁。
3. 打碎安瓿頸部，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至步驟 1 的 60 組織培養(yǎng)皿或 25 cm2 培養(yǎng)瓶。用手輕輕搖動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻，置 27℃ 溫育 2～3 h 直到細(xì)胞貼壁。
4. 除去舊培養(yǎng)液，換 3 ml 新鮮培養(yǎng)液 TNM-FH/10％FBS，繼續(xù)溫育。每 3 天換液一次（除去舊培養(yǎng)液換新鮮的），直到細(xì)胞生長匯片（形成擁擠的單層培養(yǎng)物）。
5. 當(dāng) Sf 9 細(xì)胞已生長匯片時(shí)，棄去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。加入新鮮的培養(yǎng)液，用移 液管輕柔吹打重懸細(xì)胞。
6. 用為培養(yǎng)組織細(xì)胞設(shè)計(jì)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)細(xì)胞。在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器小方格上的每一個(gè)細(xì)胞相當(dāng)于 104 細(xì)胞/ml。
7. 在一個(gè)新的 60 mm 組織培養(yǎng)皿或 25 cm2 培養(yǎng)瓶中接種來自步驟 5 的（1～2）× 106 個(gè)細(xì)胞，搖動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞均勻分布（如果制備大量培養(yǎng)細(xì)胞，可用大的培養(yǎng)瓶，裝入更多的培養(yǎng)液）。加入新鮮培養(yǎng)液 TNM-FH/ 10％ FBS 至終體積 3 ml。
8. 27℃ 溫育，每 3 天用 TNM-FH/10％ FBS 培養(yǎng)基換液，直到培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞生長匯片。
9. 棄去匯片的單層培養(yǎng)細(xì)胞中的培養(yǎng)液，并重懸細(xì)胞（同步驟 5），用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)細(xì)胞。
10. 以（4～5）× 105 細(xì)胞/ml 的密度將細(xì)胞接種于一個(gè)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶中，27℃ 溫育，以 60～80 r/min 的速度恒速攪拌。輕微開啟旁邊的通氣孔，以保證充足的空氣。
11. 每隔 2 或 3 天進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)（見附錄 3F）。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到（2～2.5）× 105 /ml 時(shí) 進(jìn)行傳代，將適量細(xì)胞移至一個(gè)含有新鮮培養(yǎng)液 TNM-FH/10％ FBS 的新培養(yǎng)瓶中，使終密度達(dá)到（4～5）× 105/ml。
12. 在 1 ml 對數(shù)生長的細(xì)胞中加入 0.1 ml 的 0.4％ 臺盼藍(lán)，測定細(xì)胞活力。在低倍顯 微鏡下檢查細(xì)胞，計(jì)數(shù)被臺盼藍(lán)染色的細(xì)胞（死細(xì)胞）和總細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出死細(xì)胞和活細(xì)胞的百分比例。
13. 將單層培養(yǎng)細(xì)胞（從步驟 5）或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞（從步驟 11）傳代至由 1 份 TNM-FH/10％FBS 培養(yǎng)液和 1 份無血清培養(yǎng)液（Bacu 10 Gold，Sf-900 II 或 ExCell 401）組成的混合培養(yǎng)液中。讓細(xì)胞長至匯片（單層培養(yǎng)），或達(dá)到（2～3）× 106 細(xì)胞/ml 的密度（懸浮培養(yǎng)）。
14. 按步驟 13 的方法重復(fù)，將細(xì)胞傳代至 TNM-FH/10％FBS 培養(yǎng)液與無血清培養(yǎng)液比例為 1 : 3 的混合培養(yǎng)液中，使細(xì)胞生長。
15. 按步驟 13 的方法，用培養(yǎng)液與無血清培養(yǎng)液比例為 1: 7 至 1 : 9 的混合培養(yǎng)液，重復(fù)細(xì)胞傳代與細(xì)胞生長的步驟。
16. 用無血清培養(yǎng)液傳代細(xì)胞。
17. 計(jì)數(shù)呈對數(shù)生長的待凍存細(xì)胞（見附錄 3F）。
18. 室溫以 1000 g（GH-3.7 轉(zhuǎn)子為 2000r/min）離心 10 min， 棄去上清液。
19. 用 TNM-FH/10％ FBS 培養(yǎng)液以（1～2）× 107 細(xì)胞/ml 的密度重懸細(xì)胞團(tuán)塊。加入等體積含 20％ DMSO 的 TNM-FH/10％ FBS 培養(yǎng)液，將細(xì)胞置于冰浴。吸出 1 ml 細(xì)胞懸液，移入帶螺口蓋的凍存管中，置于 -20℃ 1 h，然后 -70℃ 過夜。
20. 將凍結(jié)的細(xì)胞移至液氮罐中以便長期保存。
| 樂樂品牌代理情況 | |
| Viskase聯(lián)合碳化 | 透析袋 |
| Spectrumlabs仕必純 | 透析袋、透析膜片、透析柱、透析袋夾子、濃縮劑、中空纖維管、組織粉碎器、采樣管、移植管、離子交換樹脂 |
| Mei5bio聚合美 | 分子生物學(xué)：PCR、qPCR、RTPCR、超保真PCR、DNA電泳純化、克隆、點(diǎn)突變 |
| SPL | 全線耗材：細(xì)胞培養(yǎng)、發(fā)光分析、微生物學(xué)、冷凍儲(chǔ)存 |
| Solarbio索萊寶 | 全線產(chǎn)品以自營品牌為主 |
| Psaitong普西唐 | 全線產(chǎn)品：生命科學(xué)、化合物庫、精細(xì)化學(xué)、分析化學(xué) |
| Macklin麥克林 | 全線產(chǎn)品，多年代理 |
| Liofilchem利飛馳 | 藥敏紙片、藥敏紙條 |
| Chroamagar科馬嘉 | 顯色培養(yǎng)基 |
| HW杭州微生物 | 干粉培養(yǎng)基、生化鑒定管、藥敏紙片、培養(yǎng)基原料 |
| Fuheng富衡 | 細(xì)胞系、細(xì)胞房消殺抑菌產(chǎn)品 |
| Bioexplorer百澳樂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基、進(jìn)口免分裝胎牛血清、胰酶雙抗平衡鹽，細(xì)胞轉(zhuǎn)染 |
| Cellmax賽澳美 | 國產(chǎn)胎牛血清，特殊血清，胰酶雙抗，細(xì)胞培養(yǎng)添加劑 |
| 鄭州盈圣 | 國產(chǎn)動(dòng)物血清、動(dòng)物全血，尤其適合工業(yè) |
| MCE | 全線產(chǎn)品：信號通路、染料、多肽、蛋白、天然產(chǎn)物、抑制劑、化合物庫、試劑盒 |
| Smartbuffers | 各種干粉速溶顆粒緩沖液沖劑、片劑，特色產(chǎn)品訂制 |
| 美基 | RNA/DNA核酸提取 |
| 雅酶【不允許上平臺】 | WB產(chǎn)品 |
| 美國Formumax | 氯氟松，巨噬細(xì)胞去除劑 |
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
