異常

結(jié)果描述

原因分析

對策

白板

顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。

試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用

檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。

錯加、漏加試劑底物、顯色劑A或B

嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。

洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力

確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。

終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配制

每次配制時都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì)

蒸餾水有問題

確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未污染，與好蒸餾水比較。

顯色弱、靈敏度低

實驗結(jié)束后，包括陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。

試劑盒超過期， 超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號； 試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響；

實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)試劑未過期。 不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規(guī)定儲藏。

試劑、樣品用前未平衡至室溫

從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡 20分鐘左右。

加入試劑的體積和時間有誤，移液器計量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔；

確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當(dāng)。 校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應(yīng)*。

洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力

確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈，確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染。

孵育時間及孵育溫度未達(dá)到要求 ，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整。

孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作。 保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。

洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長；

嚴(yán)格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)。

顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入；

顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入

底物作用時間不夠；

準(zhǔn)確定時。

蒸餾水水質(zhì)有問題；

測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。

實驗結(jié)束后，陰陽性對照正常，質(zhì)控正常，但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱

待測標(biāo)本中可能不含強陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的

如有懷疑，可復(fù)檢

標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑

酶免實驗中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑

陰陽性對照正常，但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標(biāo)本未能檢出。

未達(dá)要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標(biāo)本，但 質(zhì)控或弱陽性標(biāo)本受 溫度變化影響較大而被未檢出

質(zhì)控品或標(biāo)本避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的，可存于 2-8℃，如需長期保存，應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝，并置于-20℃以下保存。

質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過久，或被反復(fù)凍融致待測物滴度下降，而未能檢出

重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配。

儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配

重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配

靈敏度過高、板底高、高背景

終止后，整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色；或陰陽性對照、質(zhì)控正常，標(biāo)本陰性標(biāo)本 OD值過高。

整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯加其他試劑造成，如同時操作兩對半試劑時，測 HbsAb板用于測HBsAg等；

實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)所有組分均屬于對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用

酶標(biāo)對吸頭的污染以及對盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現(xiàn)象；

避免試劑組分間的交叉污染，確保吸頭、容器的干凈

顯色劑在光照條件下放置過久，實驗前已變藍(lán)

顯色劑 A、B未使用前避光保存

孵育溫度過高或孵育時間過長；

孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作。

未按要求洗板。特別是洗滌時每孔未注滿洗液，易造成花板黃板現(xiàn)象

嚴(yán)格按說明書要求洗板

花板，一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和保存方法不當(dāng)造成

放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉(zhuǎn)速（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意。

出現(xiàn)隨機性的花板、跳孔現(xiàn)象

樣品離心不*，反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血或殘留細(xì)胞成分；

充分離心， 3000rpm6分鐘以上。

加樣時交叉污染；

加標(biāo)本時盡量 避免交叉污染。如盛標(biāo)本的試管周圍常有血痂，易脫落，應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。

手工洗板造成的交叉污染

手工洗板時前 3次注洗液后應(yīng)立即棄去，后幾次再設(shè)定浸泡時間，可減少交叉污染

洗板機加液頭堵塞導(dǎo)致加液不滿或吸液殘留量較大，造成 花板、跳孔

疏通加液頭，使洗板時每孔均注滿洗液，吸液時殘留量要小。

拍板時交叉污染

洗板完畢拍板時用合適的吸水紙巾，不要把無關(guān)物質(zhì)拍進(jìn)板孔，并盡量不要在同位置拍，以免交叉污染。

假陽性

假陽性現(xiàn)象是一個綜合現(xiàn)象，可參考上文“靈敏度過高、板底高、高背景”中的分析。這里只列舉常見的原因及對策。

計算 Cutoff值時使用的公式不正確，導(dǎo)致計算得出的CutOff值過低，從而導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性

CutOff值計算公式應(yīng)嚴(yán)格參照所屬產(chǎn)品的說明書，應(yīng)注意各個酶免產(chǎn)品的Cutoff值計算公式不盡相同

洗板時未能注滿洗液或洗板次數(shù)、浸泡時間不夠， 洗滌不充分，樣品中有其他成分殘留 導(dǎo)致花板、跳孔，假陽性增多

嚴(yán)格按說明書要求洗板。調(diào)整洗板機時，應(yīng)注意有時儀器標(biāo)示的液量與實際液量并不相符，應(yīng)根據(jù)實際情況調(diào)整至每孔注滿。

血清標(biāo)本處理不當(dāng)，如未除去細(xì)胞成分、纖維蛋白原及其它干擾物可出現(xiàn)孔底由變藍(lán)的跳孔現(xiàn)象，此標(biāo)本重復(fù)實驗結(jié)果往往是陰性；

放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉(zhuǎn)速（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意

廠家試劑質(zhì)量的變化造成

國家標(biāo)準(zhǔn)要求提高靈敏度時，廠家試劑靈敏度也相應(yīng)提高，假陽率常常有所上升，但只要在合理范圍，是可以接受的

水質(zhì)問題

防止蒸餾水污染

加酶量過多（如 50uL誤認(rèn)為100uL）或丙肝酶稀釋時加量過多

加酶前檢查移液器調(diào)節(jié)量是否準(zhǔn)確，稀釋酶時思想要集中

培養(yǎng)箱溫度超過 37℃</