細胞培養(yǎng)技術作為現(xiàn)代生物醫(yī)學研究的重要手段，?在生命科學、?醫(yī)學研究、?生物制藥等領域發(fā)揮著不可替代的作用。?滬鼎生物帶你了解細胞培養(yǎng)的基本概念、?常用方法及注意事項。?

 

一、?細胞培養(yǎng)的基本概念

細胞培養(yǎng)技術是指從生物體內取出組織或細胞，?在體外模擬體內生理環(huán)境，?在無菌、?適當溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下，?使細胞生長繁殖并維持其結構和功能的一種重要技術。細胞培養(yǎng)技術主要包括細胞培養(yǎng)的類型、?培養(yǎng)基、?細胞的消耗物質、?細胞培養(yǎng)的設備和細胞培養(yǎng)的步驟等幾個方面。

 

1. 細胞培養(yǎng)的類型

??原代細胞培養(yǎng)?：?直接從體組織中分離出來的生物細胞進行培養(yǎng)。?這種方法繁瑣且細胞數量和品質難以保證，?因此在實驗室中較少使用。?

?繼代細胞培養(yǎng)?：?從已經培養(yǎng)的細胞中分離出來的細胞進行培養(yǎng)，?是實驗室常用的方法。

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2. 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基是提供細胞分裂和生長所需營養(yǎng)物質的重要物質，?通常由肝素、?胰島素和細胞因子等多種化合物構成，?以滿足不同類型細胞對營養(yǎng)物質的需求。?

 

3. 細胞的消耗物質

細胞培養(yǎng)期間需要提供多種物質，?包括抗生素（?防止感染）?、?氣體（?氧氣和二氧化碳保證正常生長）?、?酸堿指示劑（?檢測培養(yǎng)基的酸堿度）?等。?

 

4. 細胞培養(yǎng)設備

細胞培養(yǎng)常用的設備包括培養(yǎng)箱（?控制溫度、?濕度和氧氣）?、?顯微鏡（?觀察細胞形態(tài)和生長情況）?、?細胞培養(yǎng)板（?培養(yǎng)細胞和收集細胞）?等。?

 

二、?細胞培養(yǎng)的常用方法

 

1. 細胞傳代

細胞傳代是將健康細胞從舊培養(yǎng)基中轉移到新培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖的過程。

?具體步驟：?

?貼壁細胞?：?吸盡舊培養(yǎng)基，?PBS清洗去除血清和死細胞，?加入消化液消化細胞，?待細胞收縮變圓或脫落后，?加入全部培養(yǎng)基輕輕吹打，?使細胞成單個懸浮，?離心后重懸于新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。?

?懸浮細胞?：?可直接將細胞原液分置新培養(yǎng)瓶中，?加入全部培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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2. 細胞復蘇

細胞復蘇是將凍存的細胞快速解凍并置于新培養(yǎng)基中培養(yǎng)的過程。

?具體步驟：?

準備適宜的培養(yǎng)基和血清。?

將凍存管迅速放入37℃水浴中搖動至融化。?

在無菌條件下，?將細胞懸液轉移到含有全部培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，?輕輕搖晃后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。?

三、?細胞培養(yǎng)的注意事項

1.?無菌操作?：?無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要條件，?必須確保無菌工作區(qū)域、?良好的個人衛(wèi)生、?無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。?

2.?適宜的培養(yǎng)條件?：?包括溫度（?一般為37℃）?、?pH值（?7.2～7.4）?、?滲透壓（?260～320mmol/L）?等，?這些條件對細胞的生長至關重要。?

3.?合適的培養(yǎng)基和血清?：?培養(yǎng)基和血清的種類和比例應根據細胞類型和實驗目的進行選擇。?

4.?定期觀察和記錄?：?定期觀察細胞生長情況，?記錄細胞形態(tài)、?密度和生長速度等指標，?以便及時調整培養(yǎng)條件。?

 

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