一、細胞分離液的工作原理?

細胞分離液是一種基于密度梯度離心原理設計的介質，常用成分包括聚蔗糖（如Ficoll）或硅膠顆粒（如Percoll）。不同細胞因大小、密度和沉降系數差異，在離心過程中分層，從而被精準分離。

例如：外周血單個核細胞（PBMC）?可通過Ficoll分離液與紅細胞、粒細胞區分；

腫瘤細胞?可通過特殊配方的分離液從組織碎片中富集。

 

二、細胞分離液的標準操作流程?

1. 樣本準備?

血液樣本需抗凝處理（如EDTA抗凝），組織樣本需機械破碎或酶消化成單細胞懸液。

過濾去除大顆粒雜質（推薦70 μm濾網）。

2. 配制分離液?

根據樣本類型選擇合適密度的分離液（如Ficoll-1077用于人PBMC分離）。

保持低溫（2-8℃）保存，使用前恢復至室溫，避免溫度波動影響密度梯度。

3. 梯度離心?

將樣本緩慢疊加在分離液上層，保持分層清晰（傾斜移液管沿管壁緩慢加入）。

離心參數優化：通常400-800×g離心20-30分鐘，具體根據試劑說明調整。?離心機升/降速建議設置為“低加速度"?，避免破壞分層界面。

4. 目標細胞收集?

離心后，目標細胞集中于分離液與血漿/培養基的交界層（如PBMC位于Ficoll上層）。

使用無菌吸管輕柔吸取細胞層，轉移至新管后用PBS洗滌2-3次，去除殘留分離液。

 

三、細胞分離液的五大核心優勢?

高純度與高活性?

非特異性吸附低，細胞存活率可達95%以上，且表面抗原完整性保持良好，適用于流式分析和原代培養。

 

操作簡便高效?

單次離心即可完成分離，30分鐘內獲得目標細胞，顯著提升實驗效率。

 

廣泛適用性?

覆蓋多種樣本類型：血液、組織、骨髓、腹水等；兼容T/B細胞、干細胞、腫瘤細胞等多種細胞類型。

 

可重復性高?

標準化試劑和流程確保實驗結果穩定，減少批次間差異。

 

低交叉污染風險?

化學惰性成分避免與細胞發生反應，尤其適合稀有細胞分選（如循環腫瘤細胞）。

 

四、關鍵注意事項與常見問題?

1. 嚴格避免污染?

實驗全程需在超凈臺內操作，分離液開封后需密封保存，防止微生物污染。

注意：? 血液樣本需按生物安全二級（BSL-2）標準處理。

2. 精準控制離心條件?

離心力過高會導致細胞擠壓損傷，過低則分層不徹-底。建議預先進行離心參數優化實驗。

3. 選擇適配的分離液類型?

高密度細胞（如紅細胞）選擇Percoll梯度液；低密度細胞（如PBMC）選擇Ficoll體系。

商品化分離液（如STEMCELL品牌）常針對特定細胞優化，可優先考慮。

4. 溫度與時間控制?

離心前樣本與分離液需平衡至室溫，低溫會增加液體粘度導致分層異常。

細胞收集后需在1小時內進行后續實驗，避免活性下降。

5. 質量驗證?

分離后建議采用臺盼藍染色評估細胞活性，流式細胞術檢測純度（如CD45+標記PBMC）。