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            技術文章

            豬瘟單克隆抗體ELISA實驗

            閱讀:1157          發布時間:2013-11-20

            1.豬瘟單抗純化抗原
            2.兔抗豬IgG酶標抗體
            3.豬瘟陽性血清
            4.豬瘟陰性血清
            1~4均由的生物制品所購買。
            5.elisa反應板
            6.包被液
            碳酸鈉 1.50g
            碳酸氫鈉 2.93g
            H2O加至 1 000ml
            pH值9.6
            7.PBS液
            氯化鈉 8.90g
            磷酸二氫鉀 0.20g
            無水磷酸氫二鈉 2.13g
            加雙餾水 1 000ml
            8.PBS-吐溫洗滌液
            PBS液 1 000ml
            犢牛血清 5ml
            混合即可
            9.底物溶液
            ⑴ 0.1Mol/L檸檬酸液
            檸檬酸 21g
            雙蒸餾水加至 1 000ml
            ⑵ 0.2Mol/L Na2HPO4液
            Na2HPO4·12H2O 71.6g
            雙蒸餾水 加至 1 000ml
            ⑶ pH5.0磷酸鹽-檸檬酸緩沖液
            取⑴液 24.30ml
            ⑵液 25.70ml
            混勻即可
            ⑷鄰苯二胺液
            取⑶液 50ml
            雙餾水 50ml
            磷苯二胺 20mg
            30%H2O2 0.15ml
            待鄰苯二胺溶化后再加H2O2,現用現配。
            10.終止液
            濃H2SO4(98%) 22.2ml
            H2O 177.80ml
            (二)操作方法
            1.用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯抗原、豬瘟強毒單抗純化酶聯抗原各做100倍稀釋,每孔包被100µl,4℃濕盒過整夜。
            2.次日取出,甩去孔內液體,3×3′沖洗。
            3.將待檢血清以PBS液做400倍稀釋,每孔加100µl同時將豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋,于對照孔中加100μl。37℃溫育1.5h~2h。
            4.重復第二步,取出,甩去孔內液體,3×3′洗滌。
            5.將兔抗豬IgG酶標抗體以PBS液做100倍稀釋,每孔加100μl,37℃溫育1.5h~2h。
            6.重復第4步。
            7.每孔加底物溶液100µl,室溫下觀察顯色反應。當陰性對照孔稍顯色時,立即終止反應,并以陰性孔做空白對照。
            8.每孔加終止液50µl立即于酶聯免疫吸附檢測儀測定490nm波長的光密度。
            (三)結果判定
            在豬瘟弱毒酶聯板上,OD≥0.2,為豬瘟弱毒抗體陽性;OD<0.2,為豬瘟弱毒抗體陰性。

            在豬瘟強毒酶聯板上,OD≥0.5,為豬瘟強毒抗體陽性;OD<0.2,為豬瘟強毒抗體陰性。
             

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