據研究只有10%不到的人真正會用超濾管？

回收效率低下，目標蛋白滲漏...

有的時候真懷疑自己可能用了一個假超濾管。

今天賽多利斯的“膜”法學院就來把超濾管使用過程中的干貨仔細篩一篩，助實驗室大神一臂之力！

關于“膜” 法學院之基礎篇——來自于“爺爺奶奶” 輩的超濾產品

作為世界上個商業化生產膜產品的企業，賽多利斯的膜可是有91年的歷史了。賽多利斯的膜源于曾經在賽多利斯公司附近的哥廷根大學任職的諾貝爾化學獎得主Richard Adolf Zsigmondy的發明，和大多數歷史悠久的德國產品一樣，工藝和質量嚴謹是賽多利斯秉承多年的家風。那么，關于“膜”，有哪些基本知識是經常被大家忽略的呢？

選對截留分子量，事半功倍

你是否抱怨過超濾管流速慢呢？很有可能是截留分子量選小啦！

超濾膜并非均一孔徑的膜，因此超濾膜截留分子量MWCO是標稱值，例如對分子量100kD左右的球蛋白截留＞90%的膜而被標稱為100kD。所以，如果用標稱為100kD的膜去截留我們自己100kD的樣品很有可能無法達到較高的截留效果。所以建議大家選擇的超濾膜MWCO是需要截留的目標分子量的1/6-1/2。如果首先考慮流速的因素，則選擇需要截留的目標分子量的1/2作為膜的截留分子量；如果截留效果作為主要考慮，則選擇需要截留的目標分子量的1/5或1/6作為膜的截留分子量。另外，由于膜的特性不一樣，更換品牌或是同品牌不同產品系列時，適合的截留分子量偶爾是會變化的！這點一定要多加注意呀！另外，即使是相同的截留分子量，不同的膜的流速是不一樣的，所以，選擇較高流速的膜，例如PES膜，可以讓實驗更加輕松。

另外，有小伙伴是做核酸和病毒的，如果想用超濾的方法來濃縮怎么操作呢？這個大可以放心！可以參考下表來進行選擇和試驗：

值得一提的是：由于PCR技術的發展，即便痕量DNA污染都會導致假陽性的結果，因此在進行核酸操作時推薦大家使用PCR-grade級別的超濾管。

如果需要濃縮病毒，可以參考下表選擇超濾產品：

100K、300K的Vivaspin/Vivaflow超濾產品在CAR-T和進行病毒包裝的客戶中有大量應用呢！

漏蛋白？可能你的樣品選錯了膜材質

每種膜都有化學兼容性，在使用之前要確認樣品成分尤其是樣品中的去垢劑是否和膜材質兼容，這樣才不會造成樣品的泄漏和污染。再比如有的客戶樣品中含有咪唑，含量為200mM，如果他使用Vivaspin或Vivaspin Turbo可以直接使用，因為Vivaspin或Vivaspin Turbo可以耐受500mM,而他如果選擇某些只耐受100mM的超濾管就必須進行稀釋，否則就有可能發生泄漏。因此，使用前仔細察看超濾產品的化學兼容性非常重要。

還有就是：

請養成一個好習慣: 超濾結束，等待終的實驗結果出來之后再棄去濾出液！

因為如果發生問題，可以對我們可能出現的問題進行分析。

巧用預處理，達到低濃度樣品的大回收

如果樣品濃度很低，無法做后續分析，這樣就需要通過超濾來濃縮樣品。Vivaspin采用超低吸附的PES材質濾膜，蛋白回收率高達95%，另外我們還有吸附極低的Hydrosart膜可以選擇。對于有些樣品含量非常少的情況，除了選擇我們吸附量很低的膜，我們還有如下法寶推薦！

a.盡量選擇較小的截留分子量的膜

b.選擇帶有尖角收集器的膜，以便大限度回收樣品

c.使用水平轉子優于角轉子

d.濃縮完用緩沖液清洗多次回收, 注意移液器的槍頭不要碰到膜，以免膜破裂。

e.使用前可以先對膜進行“封閉鈍化”。

鈍化步驟：先用Arium水清洗，用移液器去除殘留水分。選擇下面推薦的一種鈍化液室溫至少2小時或過夜浸泡（除了Triton X-100不推薦過夜），去除鈍化液，用Arium水沖洗3-4遍。直接使用或4度Arium水保存。

Type Concentration

Powdered milk   1% in Arium water

BSA            1% in PBS

Tween 20       5% in Arium water

SDS            5% in Arium water

Triton X-100     5% in Arium water

PEG 3000       5% in Arium water

Table 1: 封閉液

Vivaspin超濾管系列具有的尖角死體積樣品安全保護技術，防意外甩干，給珍貴的樣品更多一道保障！另外，根據蛋白的分子量和體積的不同，Vivaspin系列有多達24種不同選擇。樣品處理體積包括從100μl到20ml，截留分子量也涵蓋了2KDa到0.2um。