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10分的文章，一臺Incucyte包圓了
在細胞處于動態(tài)變化時，可能會發(fā)生意料之外或不同的變化，從而影響對分析的解讀以及實驗的成功。傳統(tǒng)細胞觀察的方法是每隔一段時間，將細胞從培養(yǎng)箱中拿出進行觀察和拍攝，這不僅可能影響細胞生長，也無法連續(xù)。
賽多利斯Incucyte® 實時活細胞分析系統(tǒng)可以幫您解決這個難題！
可直接在培養(yǎng)箱中進行連續(xù)數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月的細胞實時成像和細胞健康、運動、形態(tài)和功能分析，適用于各種細胞類型，就問你香不香？
近期，一篇蘇州大學醫(yī)學院的抑制劑篩選文章[1]正式發(fā)布，在這篇IF 10分左右的文章里，使用了很多Incucyte® 的數(shù)據(jù)，下面就跟隨陳老濕一起來解讀一下這篇論文。
骨肉瘤是兒童和青少年最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤。化療耐藥性導致骨肉瘤患者對常規(guī)治療的反應不良。新的有效治療靶點和藥物的發(fā)現(xiàn)仍然是骨肉瘤研究的主要焦點。核受體（NRs）已顯示出新的癌癥治療靶點的巨大前景。在本研究中[1]，使用針對NRs的29種調節(jié)劑進行了體外藥物篩選，Incucyte® 實時活細胞分析系統(tǒng)是本次篩選使用的主力手段。
本文技術路線如下
IC即Incucyte® 實驗縮寫。實驗中每1-2小時拍攝一次，通過計算細胞的匯合度來繪制生長曲線
實驗解讀
步驟1
在已知的29種NRs調節(jié)劑對3種骨肉瘤細胞系的單濃度（10uM）抑制實驗發(fā)現(xiàn)，有5種化合物抑制作用比較強，但其中1種對正常成骨細胞有比較強的毒性作用。
Incucyte®部分單濃度抑制實驗數(shù)據(jù)：RAR激動劑CD437，PPAR抑制劑T0070907對骨肉瘤細胞系U2OS有著很強的抑制作用
步驟2
發(fā)現(xiàn)4種化合物對多數(shù)骨肉瘤細胞系的抑制有著濃度依賴性，且對敲除了NRs的細胞系沒有抑制作用，這些化合物是特異性的針對NRs來起到抑制作用。
Incucyte®實驗：化合物對細胞的抑制有著濃度依賴性
Incucyte®實驗：化合物對敲除了NRs的細胞系的抑制作用減弱
步驟3
轉錄組學和免疫印跡結果顯示這些NRs調節(jié)劑可以通過調節(jié)PI3K/AKT/mTOR和ERK/mTOR通路來抑制骨肉瘤細胞的生長。阻斷mTOR激活的DDIT4被鑒定為這些NRs的常見下游靶基因之一。DDIT4敲除顯著減弱了這些NR調節(jié)劑對骨肉瘤細胞生長的抑制作用。
Incucyte®實驗：化合物對敲除了DDIT4的細胞系的抑制作用減弱
當然，這些抑制劑在小鼠體內實驗中也顯示了抑制作用，提示用這些NRs調節(jié)劑治療是一種新的針對骨肉瘤的潛在治療策略。
為什么越來越多的文章使用Incucyte® ？
培養(yǎng)箱內可長達數(shù)周的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝；本次實驗拍攝了10天以上，每隔1-2個小時讀取一次，大大減少人力操作，并且不像流式需要對細胞進行預處理，使得結果更準確
6個板位，分別獨立設置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高；這篇文章一次性篩選了29種化合物與4種細胞系的實驗組
高效簡便的模塊化軟件設置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數(shù)
大于100種優(yōu)化過的活細胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol，文章數(shù)大于12000篇
拍攝對象種類多，懸浮細胞、貼壁細胞、類器官和腫瘤球都可以拍攝，還有進行劃痕遷移和趨化實驗等
下載《活細胞監(jiān)測：優(yōu)化高級細胞模型的工作流程》，了解如何在細胞培養(yǎng)、細胞操作以及細胞檢測等各個階段進行細胞質量控制（QC）。
-參考文獻-
[1] Nuclear receptor modulators inhibit osteosarcoma cell proliferation and tumour growth by regulating the mTOR signaling pathway. Cell Death & Disease volume 14, Article number: 51 (2023)