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Nature 三重奏： Incucyte® 的魔力，多維藥物研發(fā)利器
可置于培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期觀察的Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)，在藥物研發(fā)領(lǐng)域展現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。它不僅成為多篇藥物研發(fā)頂刊文章的關(guān)鍵工具，而且其數(shù)據(jù)也被包含在FDA批準(zhǔn)的治療實(shí)體瘤的雙特異性T細(xì)胞接合器藥物Kimmtrak的申報(bào)資料中，這進(jìn)一步印證了其在行業(yè)中的地位。
僅在2024年4月，《Nature》就發(fā)表了三篇文章，詳細(xì)介紹了Incucyte® 在藥物研發(fā)領(lǐng)域中的應(yīng)用，內(nèi)容涵蓋小分子藥物、抗體偶聯(lián)藥物和細(xì)胞治療，突顯了其廣泛的適用性和科研價(jià)值。
下面就讓我們具體見識(shí)一下Incucyte® 魔力吧。
Nature
超越CAR-T，
新型ADC藥物有望治愈T細(xì)胞癌[1]
約翰斯·霍普金斯大學(xué)
靶向T細(xì)胞受體β鏈恒定區(qū)1 (TRBC1) 的CAR-T療法用于殺死腫瘤T細(xì)胞來治療T細(xì)胞白血病和淋巴瘤。同時(shí)原則上保留維持免疫力的健康T細(xì)胞。所以TRBC1成為治療T細(xì)胞腫瘤潛在的靶點(diǎn)。然而，首次在人類中進(jìn)行的抗TRBC1 CAR-T細(xì)胞療法臨床試驗(yàn)報(bào)告了低反應(yīng)率和CAR-T細(xì)胞的不明原因丟失。
本研究發(fā)現(xiàn)：
1
TRBC1 CAR-T與正常T細(xì)胞上的TRBC1+TCR的結(jié)合，并通過刺激CAR-T細(xì)胞和正常T細(xì)胞中的T細(xì)胞活化而誘導(dǎo)雙向殺傷。由于正常TRBC1+T細(xì)胞的自相殘殺，抗TRBC1 CAR-T細(xì)胞活性受到限制。證明了CAR-T細(xì)胞由于被患者的正常T細(xì)胞殺死而丟失，從而降低了它們的功效。Incucyte® 觀測(cè)T細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷效果及對(duì)TRBC1 CAR-T的自殺現(xiàn)象。
?圖1. Incucyte® 檢測(cè)TRBC1 CAR-T對(duì)表達(dá)TRBC1的Jurkat細(xì)胞（帶GFP熒光）的多輪殺傷作用：加入正常T細(xì)胞后，由于其對(duì)TRBC1 CAR-T的殺傷，直到第二輪就無法對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行有效殺傷（每6-8小時(shí)自動(dòng)拍攝一次）
2
開發(fā)了一種抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC），可以在體外殺死TRBC1癌細(xì)胞，并在小鼠模型中治愈人類T細(xì)胞癌。抗TRBC1抗體-藥物偶聯(lián)物可為TRBC1靶向提供最佳形式，并在T細(xì)胞癌患者中產(chǎn)生良好的治療效果。Incucyte® 觀測(cè)抗體的內(nèi)化和殺傷作用。
圖2. Incucyte® 檢測(cè)TRBC1抗體的內(nèi)化作用：TRBC1陽性的細(xì)胞對(duì)TRBC1抗體內(nèi)化明顯加強(qiáng)
圖3. ADC藥物對(duì)靶細(xì)胞的直接殺傷，每隔6-8小時(shí)拍攝一次，計(jì)算GFP陽性細(xì)胞的數(shù)量
多輪靶細(xì)胞殺傷以及ADC對(duì)靶細(xì)胞的直接追蹤時(shí)間比較長(zhǎng)（6天左右），Incucyte® 可以多個(gè)板位直接無時(shí)間限制自動(dòng)拍攝追蹤和計(jì)算，大大減少人力，并保持追蹤的一致性和準(zhǔn)確性。
Nature
微衛(wèi)星不穩(wěn)定性腫瘤藥物開發(fā)[2]
諾華制藥
解旋酶WRN通過多次基因篩選被鑒定為具有微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）癌細(xì)胞中的合成致死靶點(diǎn)。這篇文章報(bào)道了臨床階段WRN解旋酶小分子抑制劑HRO761的結(jié)構(gòu)、生化、細(xì)胞和藥理學(xué)特征。研究發(fā)現(xiàn)，HRO761是一種有效的、選擇性的、變構(gòu)的WRN小分子抑制劑，它在解旋酶D1和D2結(jié)構(gòu)域的界面結(jié)合，將WRN鎖定在無活性構(gòu)象中。
伊立替康是一種用于晚期大腸癌治療的拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。研究表明，HRO761和伊立替康在低效濃度下的聯(lián)合使用能顯著增強(qiáng)SW48細(xì)胞的抗增殖活性。而在較高劑量的HRO761下，它能阻止體外細(xì)胞的長(zhǎng)期再生。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了HRO761和伊立替康聯(lián)合用藥的益處，導(dǎo)致腫瘤完全消退。
這項(xiàng)研究揭示了HRO761作為WRN解旋酶抑制劑的巨大潛力，特別是在與伊立替康聯(lián)合使用時(shí)，對(duì)MSI癌細(xì)胞的治療效果顯著。
圖4. Incucyte® 生成的匯合圖展示了長(zhǎng)期暴露于指定濃度的HRO761和伊立替康（irinot.）組合的SW48細(xì)胞匯合情況，每7天換一次培養(yǎng)基；而在較高劑量的HRO761下，它阻止了體外細(xì)胞的長(zhǎng)期再生。
小分子抑制劑對(duì)靶細(xì)胞的長(zhǎng)期抑制能力需要培養(yǎng)30天以上，Incucyte® 大大減少人力，并保持追蹤的一致性和準(zhǔn)確性。
Nature
CAR-T細(xì)胞壽命調(diào)節(jié)因子[3]
斯坦福醫(yī)學(xué)院
超過一半接受CAR-T細(xì)胞療法的癌癥患者最終仍會(huì)復(fù)發(fā)，其中一個(gè)原因是CAR-T細(xì)胞通常難以在患者體內(nèi)存活足夠長(zhǎng)的時(shí)間以完全清除腫瘤細(xì)胞。這篇文章表明轉(zhuǎn)錄因子FOXO1能夠增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞活力，防止其耗竭，從而增強(qiáng)其抗腫瘤活性。
研究發(fā)現(xiàn)：過表達(dá)FOXO1的CAR-T細(xì)胞在慢性刺激下保留了其功能、記憶潛力和代謝適應(yīng)性，并在體內(nèi)表現(xiàn)出增強(qiáng)的持久性和腫瘤控制。FOXO1活性與接受CAR-T細(xì)胞或腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞治療的患者的臨床結(jié)果相關(guān)，強(qiáng)調(diào)FOXO1在癌癥免疫治療中的臨床相關(guān)性。過表達(dá)FOXO1可以增加人CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤活性，并強(qiáng)調(diào)記憶重編程是優(yōu)化治療性T細(xì)胞狀態(tài)的廣泛適用方法。
圖5. Incucyte® 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入FOXO1抑制劑，會(huì)導(dǎo)致對(duì)靶細(xì)胞的殺傷能力減弱（每隔2-4小時(shí)拍攝一次，10×）
圖6. Incucyte® 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多輪殺傷后，過表達(dá)FOXO1的CAR-T仍然對(duì)靶細(xì)胞具有殺傷能力
FOXO1在促進(jìn)T細(xì)胞壽命方面發(fā)揮著獨(dú)特的作用，Incucyte® 實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)觀測(cè)CAR-T對(duì)腫瘤活細(xì)胞的長(zhǎng)時(shí)程殺傷效果，且數(shù)據(jù)圖大氣上檔次！！
除了可以長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控生長(zhǎng)外，還具有以下優(yōu)點(diǎn)：-
多個(gè)板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測(cè)程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
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具有劃痕、腫瘤球、類器官、趨化、血管生成等多個(gè)分析拍攝模塊，并配套相應(yīng)的耗材
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高效簡(jiǎn)便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長(zhǎng)曲線等多指標(biāo)多參數(shù)，使得結(jié)果更加準(zhǔn)確
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大于100種優(yōu)化過的活細(xì)胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol；文章數(shù)大于15,000篇
《下一代細(xì)胞療法的創(chuàng)新解決方案》
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