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應(yīng)用大爆發(fā)：2024上半年Incucyte® 國(guó)內(nèi)成果盤(pán)點(diǎn)!
Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)是一款革命性的細(xì)胞成像設(shè)備，可以實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)數(shù)小時(shí)、數(shù)周乃至數(shù)月的長(zhǎng)時(shí)程連續(xù)觀察。其“傻瓜式”的實(shí)驗(yàn)設(shè)置和分析，以及精準(zhǔn)的各種細(xì)胞指標(biāo)計(jì)算，使得很多用戶對(duì)其愛(ài)不釋手，在細(xì)胞水平的體外實(shí)驗(yàn)中有著廣泛應(yīng)用。
無(wú)需多言，讓論文數(shù)量證明一切！在2024年上半年，陳老師收集到了近50個(gè)單位發(fā)表的逾70篇國(guó)內(nèi)論文（文獻(xiàn)列表在文末哦！）。
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圖1. 2024上半年Incucyte® 文章第一作者單位分布
從論文的分布單位來(lái)看，許多單位在半年內(nèi)就發(fā)表了多篇論文，例如華西醫(yī)院、北京大學(xué)第三醫(yī)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院等。足以說(shuō)明因?yàn)槠浜?jiǎn)單易用，短時(shí)間內(nèi)能生成多個(gè)精確數(shù)據(jù)，是發(fā)文章的利器！
圖2. 2024上半年Incucyte® 文章應(yīng)用分布
Incucyte® 的應(yīng)用種類也變得更加廣泛。使用Incucyte® 可以幫助研究人員高效地獲取實(shí)時(shí)的細(xì)胞信息，從而不會(huì)錯(cuò)過(guò)任何細(xì)節(jié)。從這些發(fā)表的論文來(lái)看，除了傳統(tǒng)的細(xì)胞增殖活性和劃痕遷移實(shí)驗(yàn)外，還有細(xì)胞黏附、克隆形成、吞噬等多種應(yīng)用。此外，還有溶酶體酸度、鈣離子檢測(cè)、EV（外泌體）攝入等新應(yīng)用。
外泌體攝入[1]
急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是一種常見(jiàn)的危及生命的綜合征，目前尚無(wú)有效的治療藥物。內(nèi)皮細(xì)胞衍生的細(xì)胞外囊泡（EC-EVs）在ALI/ARDS的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。該篇文章證明了在敗血癥中循環(huán)EC-EV的數(shù)量增加，通過(guò)靶向單核細(xì)胞并將其重新編程為促炎巨噬細(xì)胞，從而加劇肺損傷。生物信息學(xué)分析和進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，膿毒癥期間在EC-EV上過(guò)表達(dá)的VCAM1通過(guò)與單核細(xì)胞表面相互作用來(lái)激活NF-κB通路，從而調(diào)節(jié)單核細(xì)胞分化。ARDS 患者的 VCAM1 EC-EV 數(shù)量顯著增加。這些發(fā)現(xiàn)不僅揭示了膿毒癥相關(guān)ALI/ARDS的新機(jī)制，還為其精準(zhǔn)治療提供了潛在的新靶點(diǎn)和策略。Incucyte® 用來(lái)觀察EV攝入，每30分鐘拍照一次，連續(xù)監(jiān)測(cè)12小時(shí)。
圖3. 單核細(xì)胞對(duì)EV的攝入：正常內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的 EV 被稱為“N-EC-EV”，而用 LPS 刺激的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的 EV 被稱為“L-EC-EV”，兩者都用綠色熒光標(biāo)記；可見(jiàn)，單核細(xì)胞選擇性地?cái)z入L-EC-EV
EV攝入過(guò)程相對(duì)較快，使用Incucyte® 可以高頻率非干擾地連續(xù)拍攝，不會(huì)錯(cuò)過(guò)每個(gè)細(xì)節(jié)。歡迎點(diǎn)擊了解Incucyte®全新推出外泌體檢測(cè)試劑盒。
線粒體膜電位[2]
結(jié)腸癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。天然產(chǎn)物為開(kāi)發(fā)更有效、毒性更小的抗癌藥物提供了有希望的途徑，擴(kuò)大了臨床治療武器庫(kù)。在這項(xiàng)研究中，從Melia azedarach L.的果實(shí)中分離出一種三萜類化合物（EHMT），對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞具有顯著的抑制活性，同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒性。EHMT有效抑制了HCT116細(xì)胞系的集落形成，并誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯。此外，EHMT 促進(jìn)了活性氧（ROS）的產(chǎn)生和線粒體膜電位的去極化。值得注意的是，EHMT 通過(guò)激活 HCT116 細(xì)胞中的 JNK 信號(hào)通路觸發(fā) ROS 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這些發(fā)現(xiàn)使EHMT成為治療結(jié)腸癌的潛在候選藥物，為對(duì)抗這種可怕的疾病提供了新的希望。Incucyte® 用來(lái)測(cè)試線粒體膜電位的去極化。
圖4. Incucyte® 拍攝JC-1染色后的HCT116細(xì)胞（在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光）；由此可見(jiàn)，EHMT濃度越高，線粒體膜電位越低（線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件）
Incucyte® 有強(qiáng)大并且使用簡(jiǎn)單的軟件分析，可以準(zhǔn)確計(jì)算各種參數(shù)
粘附測(cè)試[3]
循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）簇在癌癥轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用。建立一種可靠的體外方法學(xué)模型，以形成生物學(xué)特性與臨床CTC簇非常相似的CTC簇。本文系統(tǒng)地優(yōu)化了培養(yǎng)方法，形成了體外CTC簇模型，并對(duì)其生物學(xué)能力對(duì)其進(jìn)行了評(píng)估。體外CTC簇模型與腫瘤轉(zhuǎn)移不同階段患者分離的CTC簇的病理特征具有高度相似性，包括CTC簇的外觀形態(tài)、大小、粘附等指標(biāo)。該研究提供了一個(gè)可靠的模型，有助于在體外獲得相對(duì)穩(wěn)定和合格的CTC簇，推動(dòng)腫瘤轉(zhuǎn)移的研究。Incucyte® 用來(lái)檢測(cè)CTC簇的粘附。
圖5. Incucyte® 檢測(cè)CTC的粘附：可以看到CTC簇比單個(gè)細(xì)胞更容易延伸和粘附，E圖是根據(jù)20h細(xì)胞面積的計(jì)算結(jié)果
Incucyte® 照片也很清晰地看到單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)
賽多利斯還提供CTC挑取神器
——全自動(dòng)無(wú)損細(xì)胞分離系統(tǒng)
溶酶體酸度[4]
糖尿病相關(guān)性牙周炎（DP）表現(xiàn)出嚴(yán)重的炎癥和對(duì)常規(guī)牙周治療的抵抗。本文研究了DP患者牙齦上皮細(xì)胞（GECs）高炎癥反應(yīng)的潛在機(jī)制—高糖條件下溶酶體功能障礙導(dǎo)致自噬通量阻塞，加劇了GECs的炎癥反應(yīng)。GECs的單細(xì)胞RNA測(cè)序和免疫組織化學(xué)分析顯示，DP患者溶酶體通路失調(diào)，其特征是溶酶體相關(guān)膜糖蛋白2 (LAMP2)和ATP6V0C(一種ATP酶)水平降低。此外，ATP6V0C缺乏的GECs表現(xiàn)出自噬受損和炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，反映了高糖刺激的效果。該發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了溶酶體損傷在DP自噬阻塞中的關(guān)鍵作用，可能為開(kāi)發(fā)針對(duì)DP的有效治療策略鋪平道路。結(jié)合溶酶體特異性指示劑，通過(guò)Incucyte®系統(tǒng)檢測(cè)酸度變化趨勢(shì)，連續(xù)監(jiān)測(cè)48h。
圖6. Incucyte® 結(jié)果：在高血糖微環(huán)境下(左圖)或者ATP6V0C敲低（右圖）情況下，對(duì)人牙齦上皮細(xì)胞(GECs)進(jìn)行體外刺激，Incucyte® 結(jié)果顯示溶酶體酸度降低，自噬被阻斷
只要有合適的活細(xì)胞染料，萬(wàn)物皆可以使用Incucyte® 表征
為什么Incucyte® 那么火熱呢？
培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)限時(shí)間的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過(guò)多操作對(duì)細(xì)胞的傷害和視野移動(dòng)
6個(gè)板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測(cè)程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
高效簡(jiǎn)便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長(zhǎng)曲線等多指標(biāo)多參數(shù)
> 100種優(yōu)化過(guò)的配套熒光試劑和耗材及詳盡的Protocol
論文>16,000篇，認(rèn)可度高
一句話：您只需放好細(xì)胞，其他就交給Incucyte® 吧！