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構(gòu)建帶有UMT的Illumina NGS文庫
閱讀：1444發(fā)布時間：2020-11-10
構(gòu)建帶有UMT（Unique Molecular Tags）的Illumina NGS文庫 | ||||||||||||||||
| ThruPLEX® Tag-seq Kit | ||||||||||||||||
| · 可信賴的實驗結(jié)果。ThruPLEX Tag-seq 技術(shù)提供了多達1,600萬個分子標簽來糾正測序誤差， 提供可信的變異檢測分析。 · 發(fā)現(xiàn)更多，成本更低。結(jié)合基于雜交技術(shù)的目標序列富集系統(tǒng)可分析數(shù)百個基因，同時分析突變和結(jié)構(gòu)變異。 · 每次都可獲得高質(zhì)量文庫。單管操作，2小時，3步操作流程。使用簡便，可減少使用者操作誤差和污染發(fā)生。 · 省時的生物信息學分析方案。采用Curio Genomics提供的云服務軟件或開源軟件可以快速獲得 研究結(jié)果。 · 珍貴樣品分析成為可能。更低的DNA起始量，以往由于起始量太低而不能分析的樣品也可以分析了。 ThruPLEX Tag-seq可以1 ng至50 ng cfDNA或片段化的dsDNA起始，兼容多種樣品類型。 | ||||||||||||||||
| ■ 產(chǎn)品說明： | ||||||||||||||||
| ThruPLEX Tag-seq采用帶有特別分子標簽（UMT）的ThruPLEX引物構(gòu)建帶有分子標記和樣品檢索引物的Illumina NGS文庫。每個試劑盒包含超過1,600萬個特別序列用于在擴增前標記每條DNA小片段，可以在文庫制備、目標富集和數(shù)據(jù)分析過程中追蹤DNA小片段，以檢測低豐度等位基因或計數(shù)獨立片段。采用ThruPLEX 技術(shù)設計及優(yōu)化，可以1到50 ng DNA起始構(gòu)建高多樣性、高重復性文庫。整個流程在單管或單孔中就可完成，只需3步，2小時，無需中間純化步驟和樣品轉(zhuǎn)移，避免了操作誤差和樣品損失。ThruPLEX Tag-seq Kit 包含所需全部試劑，包括可以多重標記96個樣品的檢索引物。純化和定量后，文庫可以采用標準Illumina測序試劑和流程在Illumina NGS平臺進行測序。 | ||||||||||||||||
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| 圖1. 單管，三步操作流程。 ThruPLEX Tag-seq Kit以1-50 ng DNA起始構(gòu)建檢索引物文庫只需3步：末端修復，接頭連接和高保真文庫擴增。無需純化和樣品轉(zhuǎn)移步驟。簡化的工作流程，在單管或單孔中2個小時即可完成，避免樣品損失，增強了陽性識別。 | ||||||||||||||||
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| 圖2. ThruPLEX DNA-seq Kit技術(shù)概要。ThruPLEX技術(shù)以片段化雙鏈DNA或游離DNA起始，只需3步反應，簡單高效。 | ||||||||||||||||
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| 圖3. 減少背景，結(jié)果更可靠。以30 ng 1% Horizon cfDNA standard，采用 ThruPLEX Tag-seq構(gòu)建文庫。Agilent SureSelect富集目標區(qū)域，~5,000X覆蓋度測序，采用Curio Genomics生物信息學平臺分析數(shù)據(jù)。采用原始數(shù)據(jù)分析，EGFR 的突變（黃色點）會被背景誤差遮蓋（左圖）。而在數(shù)據(jù)分析過程中使用UMT修正誤差，突變更容易識別（右圖）。 | ||||||||||||||||
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| 圖4. 顯著提高信噪比，發(fā)現(xiàn)更多。以30 ng（A）或10 ng Horizon cfDNA standard采用ThruPLEX Tag-seq構(gòu)建文庫，240 KB定制panel（NimbleGen SeqCapEZ）富集目標區(qū)域，HiSeq 2500 ~5,000X覆蓋度測序。Curio Genomics生物信息學分析平臺進行數(shù)據(jù)分析。 *數(shù)據(jù)來源于Takara Bio Inc. | ||||||||||||||||
| ■ 產(chǎn)品組成 | ||||||||||||||||
| · Template Preparation Buffer (Red） · Template Preparation Enzyme (Red） · Library Synthesis Buffer (Yellow） · Library Synthesis Enzyme (Yellow） · Library Amplification Buffer（Green） · Library Amplification Enzyme（Green） · Nuclease-Free Water（Clear） · Indexing Reagent | ||||||||||||||||
| ■ 保存 | ||||||||||||||||
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