根據(jù)液相色譜儀的硬件組成模塊，按照流動(dòng)相經(jīng)過(guò)的順序：流動(dòng)相溶劑瓶→高壓泵→進(jìn)樣器→色譜柱→檢測(cè)器→廢液。逐步闡述高效液相色譜儀在日常使用中正確的維護(hù)及相關(guān)的注意事項(xiàng)。

 

　　1.流動(dòng)相溶劑瓶

 

　　溶劑瓶是流動(dòng)相的起點(diǎn)，通常是盛放水相溶液或是有機(jī)相溶液。

 

　　1.水相溶液

 

　　對(duì)于水相溶液來(lái)說(shuō)，首要的問(wèn)題是防止污染。雖然液相用的水大都經(jīng)過(guò)殺菌處理，但是細(xì)菌的生命力很頑強(qiáng)，在適當(dāng)?shù)臏囟群凸庹涨闆r下，它們就會(huì)活躍起來(lái)，如果在流動(dòng)相里加入磷酸鹽一類(lèi)的添加劑，它們更是如虎添翼。所以，對(duì)于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動(dòng)相，常換常新。

 

　　2.有機(jī)相溶液

 

　　對(duì)于有機(jī)相溶液，可以不用擔(dān)心細(xì)菌繁殖的問(wèn)題。但是有機(jī)相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發(fā)生聚合，瓶子里就會(huì)出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過(guò)程的發(fā)生，裝乙腈時(shí)要用棕色的溶劑瓶，避免陽(yáng)光直射，更換乙腈時(shí)應(yīng)當(dāng)棄去瓶底剩余的溶液。

 

　　3.清洗過(guò)濾

 

　　溶劑瓶里的過(guò)濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結(jié)石英和不銹鋼，如果不慎堵塞會(huì)造成流動(dòng)相吸液不暢，因此必須進(jìn)行清洗，玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進(jìn)行超聲清洗。

 

　　4.流動(dòng)相的脫氣

 

　　脫氣的目的是為了除去流動(dòng)相中溶解的氣體，使色譜泵的輸液準(zhǔn)確，保留時(shí)間和色譜峰面積再現(xiàn)性提高;使基線穩(wěn)定，信噪比增加，防止氣泡引起尖峰，從而提高檢測(cè)器性能;減少死體積，防止填料氧化，從而保護(hù)色譜柱。目前常用的脫氣方法有以下4種。

 

　　(1)氦氣脫氣法:利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高；

 

　　(2)加熱回流法:效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染；

 

　　(3)真空脫氣法:易抽走有機(jī)相；

 

　　(4)超聲脫氣法:流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10～15min，此方法效果較差，但操作簡(jiǎn)單。實(shí)際工作中，超聲脫氣法操作簡(jiǎn)單，仍被廣泛應(yīng)用，雖然此方法有時(shí)會(huì)引起氣體溶解度的增加，但基本上能滿足日常分析操作的要求。

 

　　2.高壓泵的保養(yǎng)

 

　　泵是液相色譜的核心，泵將流動(dòng)相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中，并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。狀態(tài)正常的高壓泵是液相色譜準(zhǔn)確分析的基礎(chǔ)，所以平日一定要重視對(duì)泵的維護(hù)。

 

　　很多情況下，泵的問(wèn)題反映在壓力上，壓力波動(dòng)又是常見(jiàn)的一類(lèi)問(wèn)題。泵正常的壓力波動(dòng)通常會(huì)在2%以內(nèi)，且平穩(wěn)規(guī)律;不正常的波動(dòng)通常由氣泡和鹽造成。如果流動(dòng)相中的氣泡沒(méi)有被脫氣機(jī)除掉而到了泵以后，就會(huì)造成壓力波動(dòng)，通常我們可以通過(guò)重新清洗(purge)流路和再次脫氣流動(dòng)相加以解決。

 

　　由鹽造成的波動(dòng)主要是因?yàn)榱鲃?dòng)相中加入了濃度較高的緩沖鹽，在含鹽流動(dòng)相與有機(jī)相混合的時(shí)候，鹽會(huì)有微小的析出，從而導(dǎo)致壓力異常波動(dòng)，解決這類(lèi)問(wèn)題可以考慮適當(dāng)降低鹽的濃度。如果一定要用到此類(lèi)流動(dòng)相，可以考慮在有機(jī)相中加入一定比例的水，然后適當(dāng)提高梯度結(jié)束的終點(diǎn)。

 

　　3.進(jìn)樣器的保養(yǎng)

 

　　進(jìn)樣器分手動(dòng)和自動(dòng)兩大類(lèi)，雖然兩者工作模式不同，但使用的要點(diǎn)是基本一致的。

 

　　1.防止交叉污染

 

　　自動(dòng)進(jìn)樣器比較常見(jiàn)的問(wèn)題是交叉污染，交叉污染產(chǎn)生的原因很直接，樣品殘留在進(jìn)樣針內(nèi)外表面，并隨下一次進(jìn)樣進(jìn)入色譜系統(tǒng)。要解決交叉污染，主要靠清洗。自動(dòng)進(jìn)樣器都會(huì)有洗針的功能，如果樣品濃度較高或者是吸附性比較強(qiáng)，一定要打開(kāi)此功能；如果未打開(kāi)洗針功能，污染可能已經(jīng)殘留在了針座或流通閥上，那么這兩個(gè)部件需及時(shí)超聲清洗。

 

　　出現(xiàn)在自動(dòng)進(jìn)樣器上的另外一個(gè)問(wèn)題是峰面積重現(xiàn)性差，考慮可能與自動(dòng)進(jìn)樣器吸取樣品有關(guān)。首先觀察樣品的液面是不是足夠高，以保證進(jìn)樣器可以吸到樣品。排除這個(gè)問(wèn)題后，再察看自動(dòng)進(jìn)樣器的設(shè)置，對(duì)于一些粘度大的樣品，要降低自動(dòng)進(jìn)樣器的吸取速度。

 

　　2.精細(xì)操作

 

　　手動(dòng)進(jìn)樣器的操作要點(diǎn)大致相同，應(yīng)使用液相色譜儀平頭進(jìn)樣針，進(jìn)樣時(shí)插針應(yīng)插到底，不使用時(shí)將針頭留在進(jìn)樣器內(nèi)，使用前后都要及時(shí)清洗。

 

　　4.色譜柱的保養(yǎng)

 

　　色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，且儀器基線平穩(wěn)。色譜柱一般比較昂貴，在平時(shí)的工作中要注意以下幾個(gè)事項(xiàng)：

 

　　(1)色譜柱不能夠碰撞、彎曲或強(qiáng)烈振蕩。安裝時(shí)要保證閥件或管路的清潔；

 

　　(2)流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動(dòng)相；

 

　　(3)在滿足靈敏度的情況下，盡可能使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較“臟”，要進(jìn)行凈化或提純處理；

 

　　(4)分析結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品，并用流動(dòng)相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱；

 

　　(5)如色譜柱長(zhǎng)期不用，應(yīng)該用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或定期給柱子補(bǔ)充合適的流動(dòng)相。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以存放于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水中。

 

　　5、檢測(cè)器的保養(yǎng)

 

　　目前市場(chǎng)上檢測(cè)器的種類(lèi)繁多，而且各有特性。以常用的紫外(VWD)/二極管陣列(DAD)檢測(cè)器來(lái)說(shuō)，這兩類(lèi)都是紫外類(lèi)的檢測(cè)器，雖然光路設(shè)計(jì)不同，但是本質(zhì)原理都是相同的。

 

　　1.光源部分

 

　　檢測(cè)器中非常重要的部件是光源，光源對(duì)發(fā)射能量有要求，一旦能量衰減到一定程度，就會(huì)出現(xiàn)基線噪聲變大，靈敏度降低等一系列影響使用的問(wèn)題，因此光源是一個(gè)消耗品。通常紫外燈的壽命是2000h，當(dāng)?shù)竭_(dá)這個(gè)時(shí)限的時(shí)候，我們就要特別關(guān)注燈的能量狀況，可以通過(guò)儀器維護(hù)軟件中自帶的“燈能量測(cè)試”功能來(lái)判斷，測(cè)試的結(jié)果會(huì)分別評(píng)估低、中、高三個(gè)波長(zhǎng)段的能量，一旦某個(gè)波長(zhǎng)段的測(cè)試結(jié)果顯示失敗，就表示需要更換燈。

 

　　2.檢測(cè)池

 

　　檢測(cè)器中另一個(gè)重要部件是檢測(cè)池，也叫流通池。通常大家關(guān)心的一個(gè)問(wèn)題是檢測(cè)池被堵掉，因?yàn)闄z測(cè)池通常不是很耐壓，所以一旦被堵就很可能造成損壞。事實(shí)上檢測(cè)池通常不太容易被堵，原因是幾乎所有的顆粒雜質(zhì)都會(huì)被色譜柱攔下了，所以堵塞檢測(cè)器的東西基本都不是來(lái)自樣品的，很可能是后來(lái)“產(chǎn)生”的，比如含鹽流動(dòng)相殘留在檢測(cè)池中導(dǎo)致鹽析出。

 

　　6廢液的處置

 

　　液相色譜儀的廢液大部分含有有機(jī)溶劑，會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害，對(duì)環(huán)境也會(huì)產(chǎn)生污染，嚴(yán)禁隨意傾倒，應(yīng)及時(shí)處理。目前，國(guó)內(nèi)大部分實(shí)驗(yàn)室是將廢液送到專(zhuān)門(mén)的廢液處理站集中進(jìn)行無(wú)害化處理。