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            RIPA組織/細胞裂解液使用說明書
            
        			
            閱讀：6901      發布時間：2015-3-10
        				
            
							
				
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            RIPA組織/細胞裂解液使用說明書
            貨號：R0010
            規格：20ml/100ml
            本產品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）
            保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20 ℃保存。
            使用說明：
            如發現RIPA有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
            根據使用量，取每1mlRIPA加入10ul PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。混勻備用（PMSF現用現加）。
            1、樣品前處理：
            a)對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。
            b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
            c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 。 用玻璃勻漿器勻漿，直充分裂解。
            2、后處理：
            將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
            注意事項：
            本試劑為強烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，造成細胞裂解液粘稠，此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量SDS（1%），煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。
            如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。
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