分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

操作方法

1. 接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱 10 分鐘。
2. 將靈敏度開關調至“1”檔(若零點調節器調不到“0”時，需選用較。
3. 根據所需波長轉動波長選擇鈕。
4. 將空白液及測定液分別倒入比色杯 3/4 處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使空白管對準光路。
5. 在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器，使讀數盤指針指向 t=0 處。
6. 蓋上暗箱蓋，調節“100”調節器，使空白管的 t=100，指針穩定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。
7. 比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

三大注意事項

1. 分光光度計應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發亮不穩定。
2. 分光光度計使用前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。
3. 分光光度計在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節。