1 原  理 

本試驗通過模擬適合細菌生長、繁殖和可能產生感染的皮膚條件下，使用隨機性、雙盲的、配對比較的方法，檢測抗（抑）菌樣品12h或24h的滯留抑菌效果。

2 實驗器材 

（1）試驗產品  試驗品為25套按順序編號的樣品。每套2塊，一塊為測試樣品皂，另一塊為不含抗（抑）菌劑的對照樣品  

（2）不含抑菌劑的洗發液和沐浴液各25瓶（200mL/瓶，試驗調整階段用） 

（3）不含抑菌劑的香皂 25塊（試驗調整階段用） 

（4）胰蛋白酶大豆肉湯培養基（TSB） 

（5）胰蛋白酶大豆瓊脂培養基（TSA） 

（6）0.075mol/L的磷酸鹽緩沖液     

（7）70%酒精 

（8）恒溫培養箱 

（9）金屬筒 （直徑2.2cm、高度3cm）

（10）一次性接種環（直徑4mm） 

（11）小塑料碗（直徑2.2cm、高2.5mm） 

（12）膠帶（Darapore，3M公司生產） 

（13）尼龍刮菌棒 

（14）Triton-X 100  500ml 

（15）外用抗生素軟膏（例如：百多邦莫匹羅星軟膏） 

（16）玻璃彎棒 

（17）羊血 經脫纖維處理 

（18）金黃色葡萄球菌ATCC 27217（此株金黃色葡萄球菌是一種低毒性、對青霉素敏感、對四環素有抗藥性的色素株，曾用于許多試驗研究，沒有任何嚴重副作用）。 

（19）皮膚消毒劑 

3 試驗步驟 

（1）調整階段 
    試驗開始前 7d至 14d， 志愿者使用不含抗（抑）菌成分的香皂、洗發水和沐浴液進行日常的洗手、洗澡。此階段持續至少 7d，但不超過 14d。 

（2）清洗階段 
清洗階段共 3d，志愿者每天用抗（抑）菌樣品清洗一側前臂， 用對照樣品清洗另一側前臂，清洗過程如下： 

1）先清洗左臂，用流動水（水溫應保持在 35℃～37℃）打濕前臂內側；

2） 用香皂從手腕至臂肘上下摩擦15s；

3）用手在涂有香皂的手臂上上下摩擦泡沫45s；

4）用流動的清水沖洗前臂15s， 不要搓擦；

5）用紙巾沾干前臂. 不要搓擦；

6）重復以上步驟清洗右臂； 

7）按上面所描述的試驗步驟每日清洗前臂3次，每次間隔至少一個小時，在zui后一次清洗之后，需記錄好時間，在 12h之后，進行滯留效果檢測。在第9次清洗前臂以后，志愿者不能洗澡、淋浴或洗凈前臂，直到試驗結束。清洗前后的兩塊香皂的重量及志愿者完成清洗的情況，須記錄下來。 

（3）試驗階段 
清洗階段的第四天（zui后一次清洗后 12h或24h），將在志愿者每只前臂上劃出一個試驗區，對試驗區進行接種、封包和回收存活細菌，具體步驟如下: 

1）將金黃色葡萄球菌（ATCC 27217）連續轉種3代，取第3代培養物接種于胰蛋白大豆肉湯培養基（TSB）中，在 35℃±2℃ 的條件下培養 20h ±2h。然后用胰蛋白酶大豆肉湯適當稀釋菌懸液，使菌懸液濃度約為 108cfu/mL～109cfu/mL。

 2）細菌接種：在志愿者的每只前臂中間部位（不要在手腕和肘皺褶處），用帶有印墨直徑為3.00cm的玻璃量筒扣在皮膚上，劃分出一個試驗區。使用加樣器取10μL上述菌懸液，接種于前臂試驗區（菌落數為106cfu/試驗區～107cfu/試驗區），用一次性接種環，把接種物涂成一圓形，使其與試驗區邊緣應有 4mm～5mm的距離。 

3）封包：細菌接種后立即用小塑料碗扣于染菌區上面 ，再用膠帶將小塑料碗固定在皮膚上，記錄封包的時間。 

4）回收存活細菌：接種后 2h±5min 對前臂上接種的區域進行取樣。將金屬筒放置于試驗區中間部位，不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將 1mL 含0.1% triton-X100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液吸移至金屬筒內，用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區域內的皮膚 60s，將筒內液體吸移至試管內，再加 1mL 含0.1%triton X-100的 0.075mol/L磷酸鹽緩沖液，對該區域內的皮膚進行第二次刮洗 30s，將第二次擦洗的液體，注入含*次刮洗液體的試管中。 

5）實驗區試驗后的消毒處理: 一個實驗區采樣之后，需用70% 的酒精對實驗區進行消毒。然后對另一個實驗區以同樣方法進行采樣， 采樣結束后，先用70% 的酒精對實驗區進行消毒，然后用皮膚消毒劑對兩只前臂進行消毒處理，處理后清水沖洗，擦干，再涂少量的抗生素軟膏。 

6）平皿接種與培養:對每一個取樣進行平皿接種，以 0.0375mol/L磷酸鹽緩沖液對樣品進行10倍系列稀釋，選適當稀釋度取 0.1mL 接種于2個含5% 羊血的TSA平板表面，用玻璃彎棒涂勻，在 35℃±2℃ 的培養箱中培養 48h±4h，計數菌落數。  

7）以試驗同批次的稀釋液、培養基等分別設陰性對照。 8）抑菌率的計算 
抑菌率=[ （對照平均菌落數－試驗平均菌落數）/ 對照平均菌落數] ×100% 

4 評價規定 

（1）各次試驗陰性對照菌無菌生長。 
（2）實驗不得少于16人次，抑菌率均≥ 50%，判定該產品在規定的時間內有滯留抑菌作用。 

5 注意事項 

（1）志愿者錄用標準 

1）年齡介于18歲至65歲的男性或女性； 

2）志愿者應身體健康； 

3）前臂應完好無損且沒有皮膚病及其它皮膚問題； 

4）同意在整個試驗期間，避免使用抗（抑）菌洗液和乳膏、局部類固醇類藥和全身或局部使用抗生素，除非因為并發病癥醫生要求使用； 

5）同意在清洗階段使用非藥物香皂或洗液洗澡和淋浴，但志愿者不能清洗前臂。在第9次洗完前臂以后，不洗澡，淋浴或洗凈前臂，直到試驗結束。

（2）排除志愿者的標準  如果志愿者有下列情況之一，不能被錄用參加試驗

1）同時參加另外一個臨床試驗 

2）在過去的 14d中，參加過任何一種形式的關于清潔手或手臂的試驗 

3）對香皂、去污劑、香水或青霉素過敏 

4）懷孕婦女 

5）診斷患有糖尿病、肝炎、艾滋病（HIV陽性）等 

（3）其它試驗限制 

1）志愿者不得使用其它清潔用品； 

2）志愿者應避免洗熱水盆浴和游泳； 

3）志愿者應避免接觸未干的油漆、涂料或者其它溶劑；

4）志愿者應避免在手腕處和前臂上噴灑香水。 

（4）在試驗完成后的 48h～72h內，需檢查前臂上有無小膿皰、水皰，隆起的紅色癢皰。出現這些情況的志愿者應盡快通知檢驗單位。