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Pala, 助力單B細胞分離及聯合測序
單細胞RNA測序（scRNA-seq）作為一種高通量測序技術，它允許研究者在單個細胞水平上測量基因表達，揭示細胞群體內部的異質性，識別不同細胞類型或狀態的基因表達模式，為細胞生物學、發育生物學、疾病研究和藥物發現等領域的研究提供了新的維度和深度。
單細胞RNA測序技術起始于單細胞分離，Bio-Techne單細胞柔性系統Pala為單細胞分選提供了快速便捷的途徑。以下實驗通過單細胞柔性分選系統Pala分選經細胞活性染料及特異性熒光抗體標記的單個活化B細胞。通過對靜息及活化B細胞基因表達分析研究活化對基因表達的影響。
實驗步驟
（1）利用mCD40L-3T3飼養細胞對人原代記憶B細胞活化6天。收集活化后細胞并用抗人CD27-PE抗體及細胞活性染料CellTrackerGreen進行染色。
（2）在板中加入每孔4微升裂解液，利用單細胞柔性分選系統Pala將PE及FITC陽性細胞分選至96孔PCR板中。細胞裂解后進行cDNA合成及RNA建庫測序。
（3）每孔中進行VH及VL抗體可變區基因特異性擴增（qPCR）。
（4）基因文庫利用Illumina Nextseq進行測序，比較活化及靜息狀態下B細胞的基因表達差異。
實驗結果
（1）單細胞分離效率：經過擴增后，96孔中有93孔含有cDNA（97%）。
（2）單細胞驗證：Sanger測序表明所有的孔中都是單個細胞，不存在二聚體的情況。
（3）免疫球蛋白基因表達：免疫球蛋白qPCR結果顯示所有所有樣品中均表達重鏈IGVH，輕鏈僅表達kappa或lambda（IGVK、IGVL）中的一種。
（4）B細胞活化相關基因表達變化：觀察到多個與B細胞活化相關的基因表達發生變化。這些基因包括但不限于CD22、CD19、BLNK、PLCγ2、IRF4、BLIMP1、XBP1、CD27、CD38和CD319。
（5）免疫球蛋白亞型表達：展示了IgG、IgA以及kappa和lambda輕鏈的表達情況，這有助于了解B細胞在活化狀態下的免疫球蛋白亞型轉換。
Bio-Techne單細胞柔性分選系統Pala為單細胞分離和分選提供了一個輕柔、快速、易于操作平臺，可與下游的單細胞基因組分析聯合使用。
* 本文轉載自「ProteinSimple」微信公眾號
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美國納斯達克上市公司Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集團旗下的蛋白質分析品牌，一直致力于研發和生產更精準、更快速、更靈敏的創新性蛋白質分析工具，包括蛋白質電荷表征、蛋白質純度分析、蛋白質翻譯后修飾定量檢測、蛋白質免疫實驗如 Western 和 ELISA 定量檢測蛋白質表達等技術，幫助生物制藥、細胞治療、生物醫學和生命科學等領域科學家解決蛋白質分析問題，深度解析蛋白質和疾病相互關系。
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