引  言

隨著檢測技術的不斷發展，特別是質譜儀的普及，對于復雜樣品中微量成分的檢測，已經變得更加容易。但為了實現準確定量，仍需將微量或者痕量的目標成分與復雜基質進行分離，以減少干擾。這樣，原本簡單快速的分析過程，卻因為繁瑣的前處理操作而變得低效，費時。更重要的是，前處理步驟越多，人為因素干擾就越多，分析結果重現性和準確度將無法保證。因此，為節省人力，并得到更加準確的分析結果，對自動化前處理裝置的需求越來越多，各大儀器廠商也紛紛推出了此類產品，但由于價格昂貴，短時間內仍無法得到普及。

島津中國創新中心一直致力于開發和引進全新的分析檢測技術，幫助用戶解決實際工作中的難題。此次，將為大家介紹復雜樣品自動化分析中的在線前處理系列技術。在現有分析設備基礎上，通過追加高壓切換閥，應用超臨界流體色譜技術，配備特殊填料柱，搭建多維柱切換系統，來實現含有復雜基質的生物樣品以及食品藥品的在線前處理，并實現準確快速的自動化分析。

今天，我們首先為大家介紹通過使用二維柱切換系統和穩定同位素內標實現全血中免疫抑制劑的快速監測技術。

免疫抑制劑是對機體的免疫反應具有抑制作用的一類藥物，主要用于器官移植抗排斥反應和自身免疫疾病的治療。在臨床上，免疫抑制劑的濃度必須維持在一個有效和安全的范圍內，才能起到對治療的促進作用。常用的免疫抑制劑如環孢素A（Cyclosporin A）、依維莫司（Everolimus）、西羅莫司（Sirolimus）和他克莫司（Tacrolimus）等，由于其治療窗窄（治療濃度與中毒濃度接近），并且其代謝過程容易受個體差異，環境等因素影響，因此對該類免疫抑制劑藥物濃度進行監測，對于患者的治療具有非常重要的指導意義。

圖1. 四種常用免疫抑制劑結構式（依維莫司Everolimus、他克莫司Tacrolimus、環孢素A Cyclosporin A、西羅莫司Sirolimus）

目前，用于生物樣品中免疫抑制劑的定量方法主要有免疫分析法、高效液相色譜法（HPLC）和LC-MS/MS法等，現有方法存在專屬性差或者前處理復雜等缺點。為簡化樣品前處理過程，提高分析效率，并提高檢測結果準確性，島津公司開發了一套二維色譜質譜聯用系統，并配合穩定同位素內標技術，實現了全血樣品中的免疫抑制劑的快速監測。如下圖所示，首先在第一維流路中，使用特殊的SPE小柱對全血樣品中的免疫抑制劑進行在線捕集，并除去樣品溶液當中的蛋白和鹽。進一步，在第二維流路當中，分析流動相將免疫抑制劑從捕集小柱上洗脫至分析柱上進行分離，并通過島津公司性能穩定的臨床質譜LCMS- 8050CL進行檢測定量。

圖2. 全血中免疫抑制劑在線捕集系統

如下圖所示，該系統通過使用在線捕集系統和同位素內標技術，可以在1.4min以內完成全血當中四種免疫抑制劑的準確定量。該技術極大地簡化了全血樣品的前處理過程，提高了工作效率和分析的自動化程度，減少了人為誤差，確保得到更加準確的結果。

圖3. 全血中四種免疫抑制劑質譜色譜圖

（紅線：同位素內標；黑線：未標記物）

圖4.四種免疫抑制劑和同位素內標的離子對信息