遺傳毒性（Genotoxicity）是指遺傳物質中任何有害變化引起的毒性，而不參考誘發該變化的機制，又稱為基因毒性。遺傳毒性雜質（Genotoxic Impurities, GTIs）是指能引起遺傳毒性的雜質，包括致突變型雜質和其他類型的無致突變性雜質。致突變型雜質（Mutagenic Impurities）指在較低水平時也有可能直接引起DNA損傷，導致NDA突變，從而可能引發癌癥的遺傳毒性雜質[1]。目前遺傳毒性列表中有1574種致癌物質，亞硝胺類、磺酸酯類和苯并芘類等屬于高遺傳毒性物質。近年來，出現多起已上市的藥品中發現遺傳毒性，繼而被召回的案例。

　　例如某制藥企業在歐洲推出的抗艾滋藥物Viracept(nelfinavir mesylate)，EMA在2007年7月暫停了它在歐洲的所有市場活動，因為在其產品中發現甲基磺酸乙酯超標。經自查，發現存儲罐中乙醇殘留，放置3個月導致甲磺酸乙酯達到2300ppm，去掉存儲罐，增加對甲磺酸乙酯的控制要求低于0.5ppm，EMA對新工藝重新評估，對工廠進行現場檢查，2007年10月重新獲得上市許可。2018年7月，歐盟藥品管理局報道在其對某企業含有ARB藥物纈沙坦原料藥的藥物抽查匯總發現了雜質NDMA，其平均含量達66.5ppm，超過歐盟標 準0.3ppm。隨后已有包括美國，加拿大，挪威，德國等22個國家召回共2300批該企業的含有沙坦類原料藥的降壓藥。相關藥企沙坦原料藥中的NDMA經推斷疑似來源于藥物合成過程中使用的溶劑N,N-二甲基甲酰胺（DMF）與亞硝酸鈉在酸性條件下反應產生的微量副產物，即NDMA。隨后FDA發布了GCMS測定NDMA和NDEA的方法。2019年3月，又一種亞硝胺類雜質（NMBA）在ARB藥物氯沙坦中被發現，但是該物質不能直接被GCMS測定。 9月FDA發表聲明，在雷尼替丁中發現NDMA，但是不適用于GCMS方法測定。原因是雷尼替丁結構中，硝基和二甲胺在高溫下從母核解離，結合成NDMA，對GCMS法測定產生干擾。

　島津中國創新中心，不僅致力于科研領域，同時時刻關注各行業的發展和社會的需求，秉承著以科學技術向社會做貢獻的宗旨不斷前行。本項目針對部分亞硝胺類和磺酸酯類遺傳毒性雜質在藥品原料藥中的測定提供檢測方法，為行業客戶提供參考。針對客戶比較關心的幾種遺傳毒性雜質分別建立了方法，并完成完整的方法學驗證。

　　2019年6月，創新中心*推出遺傳毒性雜質NMBA（N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸）LC-MS/MS解決方案。與此同時，對NDMA和NDEA的研究也已在《分析試驗室》2020年39卷2期上發表雜質上發表；關于NMBA的研究已在《中國藥學雜志》2020年55卷3期上發表。如下將上述研究報告分別簡述，供行業客戶參考。

1. HS-GC-MS檢測原料藥厄貝沙坦中N-亞硝基二甲胺和N-亞硝基二乙胺

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質譜聯用儀結合HS-20頂空進樣器，建立了原料藥厄貝沙坦中N-亞硝基二甲胺和N-亞硝基二乙胺的同時測定方法。在10~500ng/mL濃度范圍內各組分線性關系良好，相關系數均達到0.999以上，100ng/mL標準品溶液連續進樣6針，各組分峰面積RSD均小于2.40%。陰性空白樣品在40，80，160ng/mL加標濃度時，回收率為100.6%-104.6%，陽性空白樣品回收率為101.8%-108.7%。該方法簡單方便，頂空進樣不污染氣化室，能夠有效的檢測原料藥厄貝沙坦中N-亞硝基二甲胺和N-亞硝基二乙胺的含量。

2. 島津中國推出氯沙坦鉀中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）解決方案

 　　本文利用島津公司LCMS-8050高效液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀，建立了原料藥中氯沙坦鉀中NMBA的測定方法。該方法中NMBA在0.1 ~ 50.0 ng/mL范圍內線性關系良好，日內和日間的精密度保留時間和峰面積的重復性良好(RSD均小于1.10%，n = 6和n = 18)，在低中高3個濃度的平均回收率在94.40 ~ 98.04%之間。該方法簡單方便，能夠快速有效的檢測氯沙坦鉀原料藥中NMBA的含量。

3. GC-MS內標法測定甲磺酸中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯 

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質譜聯用儀，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內標測定甲磺酸中甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（MES）和甲磺酸異丙酯（IMS）的方法并完成方法學驗證。在1~10000ng/mL濃度范圍內甲磺酸甲酯線性關系良好，在1~100ng/mL內甲磺酸乙酯和甲磺酸異丙酯線性關系良好，相關系數均達到0.999以上，樣品平行測定6次，計算各組分含量RSD均小于3.33%。樣品在650，850，1000ng/mL加標濃度時，MMS回收率為91.85%-103.09%，在10ng/mL加標濃度時，EMS、IMS回收率為92.21%-105.93%。該方法靈敏度和準確度高，能夠有效的檢測甲磺酸中MMS、EMS和IMS的含量。

4. GC-MS內標曲線法測定甲磺酸中甲磺酰氯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質譜聯用儀，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內標測定甲磺酸中甲磺酰氯的方法并完成方法學驗證。在1~5000ng/mL濃度范圍內甲磺酰氯線性關系良好，相關系數達到0.999，樣品平行測定6次，計算組分含量RSD為1.19%。樣品在320，400，480ng/mL加標濃度時，甲磺酰氯回收率為100.09%-109.84%。該方法靈敏度和準確度高，能夠有效的檢測甲磺酸中甲磺酰氯的含量。

5. HS-GC-MS法測定甲磺酸倍他司汀中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質譜聯用儀結合HS-20頂空進樣器，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內標，通過碘化鈉衍生化，測定甲磺酸倍他司汀原料藥中甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（MES）和甲磺酸異丙酯（IMS）的方法并完成方法學驗證。在1~250ng/mL濃度范圍內MMS和EMS線性關系良好，在1.5~250ng/mL內IMS線性關系良好，相關系數均達到0.999以上，樣品加標平行測定6次，計算各組分含量RSD均小于2.40%。樣品在80，100，120ng/mL加標濃度時，MMS、 EMS和IMS回收率在93.86%~112.21%之間。該方法操作簡單，靈敏度和準確度高，能夠有效的檢測甲磺酸倍他司汀中MMS、EMS和IMS的含量。

6. HS-GC-MS法測定甲苯磺酸舒他西林中甲苯磺酸甲酯、乙酯、異丙酯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質譜聯用儀結合HS-20頂空進樣器，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內標，通過碘化鈉衍生化，測定甲苯磺酸舒他西林原料藥中甲苯磺酸甲酯（MTS）、甲苯磺酸乙酯（ETS）和甲苯磺酸異丙酯（ITS）的方法并完成方法學驗證。在1.5~250ng/mL濃度范圍內MTS和ETS衍生化后的碘甲烷（MeI）和碘乙烷（EtI）線性關系良好，在3~250ng/mL內ITS衍生后的（iPrI）線性關系良好，相關系數均達到0.998以上，樣品加標平行測定6次，計算各組分含量RSD均小于4.50%。樣品在20，40，60ng/mL加標濃度時，MTS、 ETS和ITS回收率在92.50 %~108.13%之間。該方法操作簡單，靈敏度和準確度高，能夠有效的檢測甲苯磺酸舒他西林中MTS、ETS和ITS的含量。

7. HS-GC-MS法測定苯磺酸氨氯地平中苯磺酸甲酯、乙酯、異丙酯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質譜聯用儀結合HS-20頂空進樣器，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內標，通過碘化鈉衍生化，測定苯磺酸氨氯地平原料藥中苯磺酸甲酯（MTS）、苯磺酸乙酯（ETS）和苯磺酸異丙酯（ITS）的方法并完成方法學驗證。在1.5~250ng/mL濃度范圍內MBS和EBS衍生化后的碘甲烷（MeI）和碘乙烷（EtI）線性關系良好，在3~250ng/mL內IBS衍生后的（iPrI）線性關系良好，相關系數均達到0.999以上，樣品加標平行測定6次，計算各組分含量RSD均小于5.46%。樣品在5，10，15ng/mL加標濃度時，MBS、 EBS和IBS回收率在85.4 %~104.70%之間。該方法操作簡單，靈敏度和準確度高，能夠有效的檢測苯磺酸氨氯地平MBS、EBS和IBS的含量。

[1] 《中國藥典》2020年版四部通則增修訂內容：遺傳毒性雜質控制指導原則審核稿（新增）