HPLC肽圖分析是蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)研究中極為重要的手段之一，不但可以比較重組與天然蛋白質(zhì)結(jié)果之間的同一性，確認(rèn)基因工程上游和下游處理過程中是否發(fā)生差錯(cuò)、重組產(chǎn)物中是否存在翻譯后修飾及未預(yù)期氨基酸的變異等，而且不同批次產(chǎn)品的肽譜比較可驗(yàn)證工藝過程的穩(wěn)定性。因此，肽圖分析在生物技術(shù)藥物質(zhì)控中尤為重要。

目前肽圖分析常用方法主要是胰蛋白酶切RP-HPLC方法。蛋白樣品經(jīng)酶解后進(jìn)入HPLC，進(jìn)行色譜分離，保留時(shí)間不同的肽段依次進(jìn)入紫外檢測器進(jìn)行檢測。

島津的相關(guān)液相產(chǎn)品，例如Nexera-i系列、LC-40以及生物惰性兼容液相Nexera Bio均可實(shí)現(xiàn)蛋白類藥物的HPLC肽圖分析。

蛋白類藥物肽圖分析

電荷異構(gòu)體的存在將會影響到蛋白質(zhì)藥物的活性、結(jié)合能力、藥代動力學(xué)、免疫原性及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，從而影響藥物有效性、安全性及保質(zhì)期。同時(shí)，電荷異質(zhì)性的控制程度也反映了重組蛋白類藥物生產(chǎn)工藝的一致性。因此，在生物類似藥的研發(fā)及與原研藥的一致性評價(jià)研究中，電荷異質(zhì)性是工藝質(zhì)量控制的重要因素。

為了大限度地降低蛋白質(zhì)與固定相填料的離子相互作用及二者之間可能存在的吸附作用，電荷異質(zhì)性分析通常使用高離子強(qiáng)度的流動相，并且采用堿性或酸性分析條件。但是，高離子強(qiáng)度流動相和堿性/酸性分析條件給液相色譜儀的耐腐蝕性和系統(tǒng)穩(wěn)定性帶來嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。

ATP分析

糖基化是蛋白質(zhì)的一種重要翻譯后修飾，糖基分析主要包含唾液酸含量測定、單糖組成分析、糖基化位點(diǎn)測定、糖鏈結(jié)構(gòu)測定等。

唾液酸含量的測定是先將唾液酸從糖鏈上解離成游離狀態(tài)，再進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)衍生化，通過測定衍生化產(chǎn)物從而測定唾液酸含量，常用的方法有間苯二酚顯色法和HPLC法。間苯二酚顯色法是利用間苯二酚將游離的唾液酸進(jìn)行衍生生成有色化合物，再用紫外分光光度法測定其含量；HPLC法是利用鄰苯二胺（OPD）對唾液酸進(jìn)行衍生，然后用帶紫外檢測器的HPLC或者LC-MS/MS進(jìn)行定量。

蛋白類生物藥糖型分析

蛋白質(zhì)藥物在其生產(chǎn)、貯藏、運(yùn)輸、銷售以及用藥過程中由于外力因素的作用可能會產(chǎn)生聚集。蛋白質(zhì)聚集現(xiàn)象會導(dǎo)致蛋白藥活性和其在藥品中的濃度降低，并可能產(chǎn)生有害的毒理學(xué)作用和免疫應(yīng)答，甚至發(fā)生危及生命的藥物反應(yīng)。FDA關(guān)于聚集體的指導(dǎo)原則中就指出蛋白聚集體在人體內(nèi)極易產(chǎn)生免疫原性。

對于常見的蛋白質(zhì)低聚體（二聚~四聚體），非還原型聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDS-PAGE ）需要在變性條件下進(jìn)行，一般會影響多聚體的檢測。而體積排阻色譜法（SEC）條件溫和，不會對蛋白的形態(tài)產(chǎn)生較大的影響。因此，SEC法能較準(zhǔn)確地檢測蛋白質(zhì)中的低聚體，是蛋白質(zhì)藥物開發(fā)、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究中常用的聚集體分析方法。

大小變異體，聚體分析

應(yīng)用案例：單抗藥物聚集體分析，推薦生物惰性液相

作為細(xì)胞生長的環(huán)境和營養(yǎng)來源，培養(yǎng)基的性能很大程度上決定了細(xì)胞密度和表達(dá)產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量，因此培養(yǎng)基是工藝開發(fā)重要的環(huán)節(jié)之一。其中，在生產(chǎn)工藝優(yōu)化和確認(rèn)過程中，以及QC過程中，細(xì)胞上清液中氨基酸含量的監(jiān)測對細(xì)胞培養(yǎng)有著重大的意義。但是，離線衍生后使用HPLC分析，以及HPLC柱后衍生法檢測氨基酸等方法，不僅耗時(shí)耗力，并且對結(jié)果準(zhǔn)確度影響較大。因此，開發(fā)操作簡單、高效穩(wěn)定的分析方法，對氨基酸組成分析非常有意義。

24種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（雙波長同時(shí)檢測）