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制備液相色譜中的流動相設計與調整
制備液相色譜中的流動相設計與調整是確保實驗成功和獲得準確數據的關鍵步驟。以下是對流動相設計與調整的詳細解釋，包括分點表示和歸納，以及參考文章中的相關數字和信息：
一、流動相配置注意事項
混合方式：
流動相的混合通常按照體積比（V/V）進行，因為溶液的體積隨溫度變化而變化，按重量比混合雖然重復性較好但操作繁瑣。
例如，配置50%乙腈水溶液時，可以直接量取乙腈500ml和水500ml，然后充分混合。
試劑要求：
高效液相色譜儀對試劑的純度有嚴格要求，如甲醇、乙腈等必須為色譜級純。
水應為超純水或購買質量有保證的純凈水。
二、流動相設計與調整原則
由強到弱：
一般先用極性強的90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進行試驗，根據出峰情況調整有機溶劑的比例。
三倍規則：
每減少10%的有機溶劑（甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加3倍。這是一個省力且有效的調整方法。
粗調轉微調：
當分離達到一定程度時，應將有機溶劑10%的改變量調整為5%，并逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。
三、流動相pH值的調整
弱酸樣品：
流動相的pH值越小，組分的k值越大。當pH值遠低于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在。
分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量的弱酸，如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。
弱堿樣品：
對于弱堿樣品，情況相反。分析時通常在流動相中加入少量的弱堿，如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
四、含緩沖鹽流動相的配制
配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級純，稱樣要精準。
配置好后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。
注意：緩沖鹽要臨用新配。
總結
流動相的設計與調整是液相色譜實驗中至關重要的一環。通過合理的混合方式、試劑選擇、pH值調整以及含緩沖鹽流動相的精確配制，可以確保實驗的高效性和準確性。同時，根據實驗需要，靈活運用由強到弱、三倍規則和粗調轉微調等原則，可以進一步優化實驗條件，提高分離效果。