BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，在562 nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。測定其在562 nm處的吸光值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)很小。試劑盒中提供了濃度穩(wěn)定的蛋白標準品用于制作標準曲線。

BCA 蛋白定量試劑盒可用于試管法檢測，也可用于微孔板法檢測。試管法需較大量蛋白樣品(100 μL)和工作液(2 mL)，蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為1:20(v/v)，蛋白質(zhì)測定范圍為20-2000 μg/mL，采用加強法可以檢測到 5 μg/mL；微孔板法操作簡單方便，僅需少量(10-25 μL)的蛋白樣品和工作液(200 μL)，蛋白樣品與工作液的比率為1:20(v/v)或者1:8(v/v），蛋白質(zhì)測定范圍為 20-2000 μg/mL，采用加強法可以檢測到 5 μg/mL。

BCA蛋白定量試劑盒價格是多少？

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BCA蛋白定量試劑盒使用方法

一、配制標準品和工作液

1. 配制 BSA 標準品體系（線性范圍20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL標準品制備各2種配置方法，請根據(jù)習(xí)慣選用恰當方式）。【注】：BSA 標準品濃度為2 mg/mL，稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用水或 1 X PBS 進行稀釋。

BSA 標準品體系配制表（配制后可放置于4℃ 冰箱多次使用）

表1.微孔板檢測BSA 標準品體系配制（線性范圍 20-2000 μg/mL）配置方法一

表2.微孔板檢測BSA 標準品體系配制（線性范圍 20-2000 μg/mL）配置方法二

表3.BSA標準品體系（微孔板檢測，線性范圍 5-250μg /mL）配置方法一

表4.BSA標準品體系（微孔板檢測，線性范圍 5-250μg /mL）配置方法二

2. 配制 BCA工作液

(1) 計算所需要的總BCA 工作液體積。總BCA工作液體積=（標準品數(shù)量+待測樣品數(shù)量）x重復(fù)數(shù)x每個樣品所需要的BCA 工作液。【注】：試管法檢測時每個樣品加 2.0 mL BCA 工作液，微孔板檢測每個樣品加200 μL BCA 工作液。

(2) 配制BCA工作液：50 體積的BCA 試劑 A 中加入1 體積的BCA 試劑B（A:B=50:1），充分混勻。【注】：BCA工作液裝入密封容器內(nèi)，室溫條件24h 穩(wěn)定。

二、檢測方法

1. 試管檢測方法（樣品:BCA工作液=1:20）

(1) 各取100 μL 標準品和待測樣品加入到反應(yīng)管中。

(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混勻。根據(jù)待測樣品的濃度范圍選擇孵育時間和溫度。

標準孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室溫2h（檢測范圍：20-2000 μg/mL）

增強孵育方法：60℃ 孵育30 min（檢測范圍：5-250 μg/mL）

【注】：BCA 檢測蛋白濃度，延長孵育時間會加深顏色反應(yīng)。升高溫度會加快顯色反應(yīng)，但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。

(3) 冷卻到室溫。在分光光度計上進行檢測，設(shè)定波長為 562 nm，在10 min內(nèi)對所有樣品讀數(shù)。【注】：由于BCA 反應(yīng)達不到真正的反應(yīng)終點，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會繼續(xù)。但是，由于室溫下生色比率相當?shù)停虼巳羰?0 min 內(nèi)能對所有的樣本進行 562 nm 吸光度的測試，不會導(dǎo)致明顯錯誤。

(4) 根據(jù)BSA 標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù)），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm）。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。

2. 微孔板檢測方法（樣品: BCA工作液=1:20）

(1) 各取10 μL標準品和待測樣品加入到微孔板中。【注】：樣品與工作液比例為1:20，檢測范圍為125-2000 μg/mL。若樣品濃度非常低，可使用25μL 標準品和待檢測樣品進行檢測（即1:8），這時試劑盒的檢測范圍為 20-2000 μg/mL。

(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液，槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板，37℃ 孵育30 min。

(3) 冷卻到室溫，在酶標儀上的562 nm 波長范圍處檢測吸光度。

(4) 根據(jù)BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)），繪制標準曲線（ X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm）。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。