疫苗，是2020年一個(gè)被頻繁提及的詞，在以后的很長一段時(shí)間里也會(huì)持續(xù)出現(xiàn)在大家的視野中。接種疫苗是預(yù)防和控制傳染病經(jīng)濟(jì)、有效的公共衛(wèi)生干預(yù)措施，對(duì)于家庭來說也是減少成員疾病發(fā)生、減少醫(yī)療費(fèi)用的有效手段。

不同疫苗的生產(chǎn)時(shí)間各不相同，有的疫苗可能需要22個(gè)月才能生產(chǎn)出一個(gè)批次。疫苗的開發(fā)是一個(gè)漫長而復(fù)雜的過程，且成本很高。為保證疫苗的安全性和有效性，降低接種疫苗的副作用和雜質(zhì)的免疫干擾，需要對(duì)疫苗進(jìn)行有效的分離純化，去除細(xì)胞培養(yǎng)液中的其它雜質(zhì)，提高疫苗有效成分的含量和純度。本文簡要介紹了疫苗分離和純化的當(dāng)前方法，以及疫苗純化技術(shù)的應(yīng)用，發(fā)展和前景。

疫苗純化路線

疫苗在研制方式、組成成分和物理、化學(xué)性質(zhì)及原始來源等諸多方面都存在或大或小的差異，其分離純化方法具有相對(duì)特殊性。針對(duì)不同的疫苗應(yīng)選用不同的分離純化路線，但一般而言，都包括兩個(gè)基本階段：初級(jí)分離和精制純化。初級(jí)分離階段的主要任務(wù)是分離細(xì)胞和培養(yǎng)液，破碎細(xì)胞釋放產(chǎn)物(如果產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi))，濃縮產(chǎn)物和去除大部分雜質(zhì)等，這一階段可選用的分離方法包括細(xì)胞破碎技術(shù)、離心沉降、鹽析和超濾濃縮技術(shù)等；精制純化階段則選用各種具有高分辨率的技術(shù)，以使目的蛋白和少量干擾雜質(zhì)盡可能分開，達(dá)到所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，超速離心技術(shù)和各種層析技術(shù)成為當(dāng)前達(dá)到此目的的主要方法。

膜技術(shù)（粗純技術(shù)）

膜分離和超速離心純化技術(shù)在疫苗、蛋白組分、多肽及生物大分子的純化過程中有著廣闊的發(fā)展前景。用該工藝制備的疫苗，純度和性狀符合規(guī)程要求，但抗原回收率相對(duì)較低、操作繁瑣且周期長、技術(shù)設(shè)備要求高，近年來已逐漸為日臻成熟的層析技術(shù)所代替，在基因工程疫苗的研制中尤為如此。

層析技術(shù)（精純技術(shù)）

凝膠過濾色譜

也稱為排阻色譜，凝膠滲透，凝膠色譜，分子篩色譜等。它是液相色譜中按分子大小分離的技術(shù)。它主要用于組分分離：脫鹽，更換緩沖液，去除有害試劑，純化蛋白質(zhì)，肽，多糖等生物分子。具有更換緩沖液快速，溫和，產(chǎn)率高。適用于任何緩沖液系統(tǒng)。

離子交換色譜

離子交換色譜法是一種吸附色譜法，可根據(jù)樣品電荷差異起到分離作用。它被廣泛用于所有純化階段和所有規(guī)模生產(chǎn)，具有可控，高選擇，高容量，樣品濃縮和高回收率特點(diǎn)。另外，沒有一種離子交換是完美的。選擇正確的離子交換介質(zhì)非常重要。不同的樣品和不同的純化目的需要不同的離子交換介質(zhì)。此外，值得注意的是，樣品在上樣之前要進(jìn)行處理：除去顆粒物（離心或過濾方法），調(diào)節(jié)pH和離子強(qiáng)度（使用脫鹽或緩沖液交換方法）。

疏水色譜

疏水色譜法是基于液相色譜中生物分子的疏水性的技術(shù)。它是離子交換技術(shù)，凝膠過濾技術(shù)和親和色譜技術(shù)的補(bǔ)充。具有溫和且不變性的純化；這也是一種濃縮技術(shù)；它具有高選擇性和高收率的特點(diǎn)。

親和層析

親和色譜是一種通過生物分子之間的特異性相互作用來分離生物分子的技術(shù)。這是一種特別易于使用的方法，該方法簡單易用，純度高且樣品濃縮。純化蛋白質(zhì)更常見，因?yàn)樗子谑褂谩Ｒ徊郊兓梢允辜兌却笥?5％，去除特定雜質(zhì)并快速分離。它廣泛用于分離單克隆抗體和多克隆抗體，融合蛋白，酶，DNA結(jié)合蛋白以及任何可以結(jié)合其配體的蛋白。

方法組合設(shè)計(jì)純化工藝

用于傳統(tǒng)疫苗和新型疫苗的純化技術(shù),必須依靠各學(xué)科相關(guān)技術(shù)之間的結(jié)合而發(fā)展起來的，至今尚無一項(xiàng)技術(shù)能單獨(dú)承擔(dān)分離純化的全過程。創(chuàng)新的分離純化工藝，往往是由多項(xiàng)新技術(shù)和原有技術(shù)的優(yōu)勢(shì)組合而成。傳統(tǒng)的離心、過濾和沉淀技術(shù)更多只是作為整個(gè)疫苗分離純化工藝的起始步驟，用于初步分離過程，層析技術(shù)與沉淀、離心等傳統(tǒng)分離技術(shù)的結(jié)合已逐漸成為疫苗分離純化的主流。

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