反相高效液相色譜（RP-HPLC）是液相色譜中zui常用的模式，廣泛應用于化工制藥生物工程等領域。RP-HPLC中溶劑系統的選擇和優化一直是液相色譜領域的熱門研究課題，對于多組分目標物的分析與分離，有效選擇并優化色譜溶劑系統仍存在很多問題，本研究考察了溶劑系統的強度，極性等參數對RP-HPLC分離性能的影響。
示例
色譜柱：UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm；
柱溫：25℃；
檢測器：UV225nm；
流速：1.0mL/min；
進樣量：10μL。
流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN，A：B=3：7，
色譜柱：Xtimate® 4.6mm×150mm，5μm。
流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN，A：B=3：7，
色譜柱 ：UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm。
由圖譜判斷8.6min峰內夾雜小峰未分開，UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm更適合分離。
考慮不同溶劑洗脫強度不同，有機相中加入甲醇，流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=8：2，A：B=3：7。
從圖譜中可以看出加入甲醇后峰明顯分離。
調整有機溶劑比例，流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=3：7。
調整有機溶劑比例后可以得出10.7min和11.9min分離度增加到3.0。
優化方法，流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=4：6。
從圖譜中可以看出將峰分開，分離度增大，適當的調整有機相種類及比例可以提高分離性能。
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