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            案例分享 | 帶你了解多肽的分離

            閱讀:1731      發布時間:2022-9-14
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            01 多肽的性質

            多肽由多個氨基酸依次連接而成的化合物,氨基酸是兩性化合物,具有兩性離子的特性。


            02 影響多肽分離的因素

            1

            色譜柱填料孔徑(120?、300?)

            2

            添加劑及濃度(甲酸、離子對試劑)

            3

            pH

            4

            洗脫溶劑(乙腈、甲醇、異丙醇)

            5

            梯度

            6

            溫度

            7

            流速

            孔徑是指硅膠球上小孔的直徑。分子進入小孔,在小孔內被鍵合的烷基吸附,達到分離的效果。孔徑小,含孔率高,比表面積大,載碳量高。分子在孔內分離,孔徑大小必須和分子大小相匹配,分子必須能進入孔內,一般小分子使用80-120?,大分子通常使用300?,為了達到最佳分離,一般要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上。

            低pH減少了酸性側鏈的解離,離子對試劑(比如三氟yi酸)與肽鏈堿性側鏈作用,中和其電性,電荷的減少使多肽的疏水作用增強,堿性多肽側鏈與硅醇基無法產生吸附,但離子對試劑會使得MS的離子化效率降低。Mid-Autumn Festival


            03 項目案例 

            液相上的分離:

            色譜柱:月旭UItimate® XB-C18(2.1×100mm,5μm 300?)。

            流動相:梯度 A(0.1%三氟yi酸) B(0.1%甲酸乙腈);

            柱溫:40℃;

            紫外檢測器:220nm;

            流速:0.3mL/min;

            進樣量:5μL。

            微信截圖_20220914100538.png

            討論:

            多肽化合物分子量大約為2000,選擇120?孔徑和300?孔徑均可以達到有效保留,在實驗過程中發現120?的峰形差,分析可能是該物質在這個體系中的分子體積較大,故在300?的柱子上峰形有了明顯的改善。可見分子量可以用于選擇填料孔徑的參考,但不是絕對的,做多肽時建議常規孔徑120?和大孔徑300?的色譜柱都做一下嘗試,選擇更合適的孔徑;

            流動相中使用甲酸為添加劑時沒有保留,選擇具有離子對作用的三氟yi酸時保留良好,該體系是檢測多肽時的常規shou選體系,再根據該體系下的結果進行調整。


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