實(shí)用干貨 | 如何進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)？

細(xì)胞計(jì)數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的重要步驟，“傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法"是在顯微鏡下使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板人工計(jì)數(shù)。這里博大博聚為大家介紹下傳統(tǒng)細(xì)胞計(jì)數(shù)的詳細(xì)的步驟，供大家參考。

1、準(zhǔn)備好血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

1)     先用無(wú)水乙醇清潔血細(xì)胞計(jì)數(shù)板表面和蓋玻片；

2)     再用純水清潔血細(xì)胞計(jì)數(shù)板表面和蓋玻片；

3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

4)     在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池上方蓋上專用的蓋玻片。

注意：最好不要擦拭血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池，防止標(biāo)識(shí)線損壞。

2、制備細(xì)胞懸液

1)     貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，使用胰酶消化的方法使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶表面脫落；

2)     漩渦混勻或使用移液器反復(fù)吹吸細(xì)胞懸液，盡量減少細(xì)胞團(tuán)簇；

3)     懸浮細(xì)胞則可以直接進(jìn)行取樣計(jì)數(shù)；

4)     細(xì)胞懸液濃度控制在1×10⁶個(gè)細(xì)胞/mL左右。

注意：

a)      盡量少、盡量小的細(xì)胞團(tuán)簇；

b)     如需計(jì)算活率，則需將細(xì)胞懸液按照1：1的比例加入等量的0.4%的臺(tái)盼藍(lán)染料，混勻后，靜置1~2分鐘。    

3、細(xì)胞加樣

1)     移液器輕吹細(xì)胞懸液使其混合均勻；

2)     將細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)染料按1:1體積混合均勻；

3)     取出10uL細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液滴加于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板邊緣凹槽處，此時(shí)液滴將在虹吸的作用下進(jìn)入蓋玻片下方的計(jì)數(shù)池。

注意：                                              

1)     每次加樣前要混勻細(xì)胞懸液，防止細(xì)胞沉降造成取樣誤差增大；

2)     加樣過(guò)程中，要一次性將細(xì)胞懸液注入計(jì)數(shù)室，防止氣泡產(chǎn)生，否則要重做；

3)     加樣時(shí)不要將細(xì)胞懸液直接吹入計(jì)數(shù)池，會(huì)造成細(xì)胞分布不均勻。

4、 人工細(xì)胞計(jì)數(shù)

計(jì)數(shù)工具：10X物鏡的顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

1)     加樣后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板靜置數(shù)分鐘；

2)     把血細(xì)胞計(jì)數(shù)板放置在顯微鏡的載物臺(tái)進(jìn)行觀察-計(jì)數(shù)-記錄；

3)     分別計(jì)數(shù)大方格1-2-3-4中的細(xì)胞總數(shù)。

注意：

1)     計(jì)數(shù)時(shí)建議重復(fù)1-2次，取平均值，減小計(jì)數(shù)誤差；

2)     四個(gè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)量偏差不應(yīng)超過(guò) 5%，否則要重新加樣。

3)     對(duì)橫跨刻度上的細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右"的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。

4)    為降低細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差，濃度最好控制在1×10⁶個(gè)細(xì)胞/mL左右；

5)     計(jì)數(shù)時(shí)，只計(jì)數(shù)完整的細(xì)胞，如有聚團(tuán)細(xì)胞則按一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5、 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板濃度計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)

（中國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)：JJG 552-1988血細(xì)胞計(jì)數(shù)板試行檢定規(guī)程）

1)     如上圖所示，當(dāng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板放上蓋玻片后，平臺(tái)與蓋玻片之間的距離 (即高度)為 0.1mm；

2)     平臺(tái)中心部分各以3mm長(zhǎng)，3mm寬精確劃分為9個(gè)大方格，稱為計(jì)數(shù)室，每個(gè)大方格面積為1mm²，體積為 0.1mm³；

3)     細(xì)胞濃度 (mL)=(四個(gè)大方格細(xì)胞數(shù)之和)/4X2（染液稀釋倍數(shù)）X 10⁴⁼？個(gè)細(xì)胞/mL。

注意：如果不加入臺(tái)盼藍(lán)染料，則無(wú)需乘以2。

相信有些小伙伴，即使花費(fèi)很長(zhǎng)時(shí)間熟悉，并實(shí)際接觸細(xì)胞計(jì)數(shù)操作的全部流程后，還是會(huì)有結(jié)果不滿意、人工操作效率低、結(jié)果無(wú)法一目了然、細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)到“眼疼"的情況。

在這里，我向大家推薦一款博大博聚自主研發(fā)的、可以使用標(biāo)準(zhǔn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀！

6、全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀——JSY-SC-031N型

全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（JSY-SC-031N型）是一款一體式明場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，內(nèi)置10X光學(xué)放大系統(tǒng)、全自動(dòng)調(diào)焦裝置、精密的X、Y、Z三軸聯(lián)動(dòng)平臺(tái)、強(qiáng)大的細(xì)胞識(shí)別算法。

儀器使用標(biāo)準(zhǔn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，可實(shí)時(shí)預(yù)覽細(xì)胞圖像，將傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)方式可視化、自動(dòng)化、智能化，為您呈現(xiàn)真實(shí)可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上機(jī)實(shí)拍圖案例

8、細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果包括

總細(xì)胞濃度、活/死細(xì)胞濃度、活/死細(xì)胞比率、總細(xì)胞聚團(tuán)率/濃度、活細(xì)胞聚團(tuán)率/濃度、死細(xì)胞聚團(tuán)率/濃度等計(jì)數(shù)結(jié)果、原始圖片、識(shí)別圖片、柱狀圖、散點(diǎn)圖、等高線圖、報(bào)告單等…

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