激光共聚焦顯微鏡的介紹

閱讀：601發布時間：2022-11-21

　　一、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)是一種利用計算機、激光和圖像處理技術獲得生物樣品三維數據、先進的分子細胞生物學的分析儀器。主要用于觀察活細胞結構及特定分子、離子的生物學變化，定量分析，以及實時定量測定等。

　　二、原理：

　　(1)采用點光源照射標本，在焦平面上形成一個輪廓分明的小的光點，該點被照射后發出的熒光被物鏡收集，并沿原照射光路回送到由雙向色鏡構成的分光器。

　　(2)分光器將熒光直接送到探測器。光源和探測器前方都各有一個針孔，分別稱為照明針孔和探測針孔。兩者的幾何尺寸一致，約100-200nm；相對于焦平面上的光點，兩者是共軛的，即光點通過一系列的透鏡，最終可同時聚焦于照明針孔和探測針孔。

　　(3)每一幅焦平面圖像實際上是標本的光學橫切面，這個光學橫切面總是有一定厚度的，又稱為光學薄片。由于焦點處的光強遠大于非焦點處的光強，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統的景深近似為零，沿Z軸方向的掃描可以實現光學斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學切片。

　　(4)激光共聚焦的工作原理簡單表達就是它采用激光為光源，在傳統熒光顯微鏡成像的基礎上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過計算機控制來進行數字化圖像采集和處理的系統。

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