1、合適的細胞培養基
合適的細胞培養基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營養和促使細胞生長增殖的基礎物質，而且還提供培養細胞生長和繁殖的生存環境。
2、血清
目前，大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養成分。
3、無菌無毒細胞培養環境
無菌無毒的操作環境和培養環境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。
在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質污染，或者自身代謝物質積累，可導致細胞中毒死亡。因此，在體外培養細胞時，必須保持細胞生存環境無菌無毒，及時清除細胞代謝產物。
4、恒定的細胞生長溫度
維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養溫度要求也不同，人體細胞培養的標準溫度為36。5℃±0。5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。
培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。
相反，溫度不低于0℃時，對細胞代謝雖有影響，但并無傷害作用；把細胞放入25-35℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數小時后，再回到37℃培養，細胞仍能繼續生長。細胞代謝隨溫度降低而減慢。當溫度降至冰點以下時，細胞可因胞質結冰受損而死亡。
但是，如果向培養液中加入一定量的冷凍保護劑（二甲亞砜或甘油），可在深低溫下如-80℃或-196℃（液氮）長期保存。
5、合適的氣體環境
氣體是哺乳動物細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。