對于紫外可見分光光度計而言在使用前必須要做基線校正，對于此項工作的原理和操作方法許多使用者的認識不盡相同；為此談談我們的認識。
1、為何要做基線校正？
大家都知道，紫外可見分光光度計的光學系統(tǒng)基本是由光源、單色器、檢測器等三部分組成的。在我們使用的波長區(qū)域中，上述部件在不同的波長下的響應值均不相同；通俗地說、即使沒有樣品，儀器如果不做基線校正，那么在190nm至1100nm的范圍中，吸光值或透過率不會是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。
2、被校正的基線種類和用途：
①系統(tǒng)基線：
所謂系統(tǒng)基線就是儀器固有的波長范圍的總基線；例如一臺紫外可見分光光度計出廠設計的波長全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統(tǒng)基線就是這個范圍。一般來講，作為分析人員對一臺儀器做全程掃描測試是比較少見的；之所以要做系統(tǒng)基線的目的一般是將儀器的光學系統(tǒng)的響應值校正到基本一致；這就類似馬拉松賽跑一樣，只要大家在同一起跑處比賽，前后差幾米出發(fā)無所謂。
②用戶基線：
所謂用戶基線就是分析者自己設定的測量波長區(qū)域的一段基線；由于這是分析所需要的區(qū)域，為了保證測試的準確性，故用戶基線的校正是非常重要和必要的；這就類似百米賽跑一樣，運動員要在同一個起跑線上比賽而不能搶跑，否則無法準確計算成績。
3、基線校正的方法
①系統(tǒng)基線：
系統(tǒng)基線的校正較為簡單，一般情況下樣品室內(nèi)不放樣品，僅做光學系統(tǒng)的校正；如果一定要使用全波段的測量那另當別論。同時需要注意的是：系統(tǒng)基線無需經(jīng) 常校正，一般半個月或一個月校正校正一次即可。對有的儀器來說，系統(tǒng)基線校正過于頻繁反而會造成基線漂移嚴重。
②用戶基線校正方法：
兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長范圍要大于分析波長范圍；例如、分析設定范圍為220nm-500nm，那么校正波長就要設定為210nm-510nm；等待校正結(jié)束后再將波長設定回到原來的220nm-500nm范圍。
4、基線校正的注意事項：
①基線校正時要保證紫外可見分光光度計有一定的預熱時間；
②每更換一種參比溶液后均要重新做基線校正；
③如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時測試結(jié)果會出現(xiàn)負值，此時要考慮使用何種溶液做基線校正了。
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